[发明专利]抗人G2A单克隆抗体以及检测人巨噬细胞G2A表达量的试剂盒

说明书

本发明抗人G2A单克隆抗体以及检测人巨噬细胞G2A表达量的试剂盒，涉及一种单克隆抗体，特别是涉及一种用于检测人巨噬细胞G2A表达量的单克隆抗体。其目的是为了提供一种能够与G2A特异性结合的抗人G2A单克隆抗体，以及利用该抗体制备的检测人巨噬细胞G2A表达量的试剂盒及其使用方法。本发明的抗人G2A单克隆抗体，轻链CDR3的序列为EVGLQVPWTSC；重链CDR3的序列为HRTISRTFQKFEI。本发明的抗人G2A单克隆抗体能够与G2A特异性结合，并用于用于评估多发性硬化症的自身免疫情况，及其它自身免疫性炎症性疾病的病理状况。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体，特别是涉及一种用于检测人巨噬细胞G2A表达量的单克隆抗体。

背景技术

巨噬细胞是机体免疫反应重要组成部分，其主要分为I型和II型巨噬细胞(M1型和M2型巨噬细胞)两大类，特别是I型巨噬细胞对自身性免疫疾病的发生和发展起到非常重要的作用。当前，针对M1/M2型巨噬细胞的鉴定和分类主要通过检测其分泌的多种促炎和抑炎型细胞因子，并通过比较促炎和抑炎型细胞因子水平的相对高低来确定，目前还没有发现一个单一的、特异性的细胞表面标志物可用来鉴定M1/M2型巨噬细胞，检测过程复杂且不能定量。

在多发性硬化症诊断的过程中，血液学检查是帮助提高体征检查、影像学检查意义的一项重要的检测方法。近年来的研究发现，多发性硬化症患者外周血巨噬细胞主要呈现为M1型巨噬细胞，其是多发性硬化症发病和发展的重要因素，因此快速检测和鉴定M1型巨噬细胞的血液水平也成为了多发性硬化症诊断的重要指标。目前对M1型巨噬细胞的检测主要通过测定多项细胞因子的mRNA和蛋白水平来确定，但是这种检测方式需检测多个标志物，且检测方法操作繁琐、费时费力，数据判断标准模糊，且同疾病的相关性不高。因此，临床上急需一个M1型巨噬细胞特异的、同炎症和疾病相关性高的细胞表面标志物，能够快速地通过流式细胞仪来进行定量的检测和判断。另外，这项标志物也可以推广成为可在其它自身免疫疾病中鉴定M1型巨噬细胞的指标。

我们通过实验研究发现测定G蛋白偶联受体(G2A)的表达，可以作为反映M1巨噬细胞炎症存在，在临床上用于判别人体存在炎症程度的指标，特别是对于有M1巨噬细胞参与的炎症。由于G2A是G蛋白偶联受体，具有蛋白/细胞膜一体的稳定性结构，因此很难做成单抗。目前国际上并没有很好的抗人G2A单克隆抗体，所以相关实验都是基于多抗来进行。由于多抗来源不稳定，批号之间差异大，相比单抗，用作检测抗体优异性差。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能够与G2A特异性结合的抗人G2A单克隆抗体，以及利用该抗体制备的检测人巨噬细胞G2A表达量的试剂盒及其使用方法。本发明的抗人G2A单克隆抗体是通过设计的分段组合抗原制备的，然后以此单抗为基础制备了检测人G2A表达量的试剂盒，建立了测定人G2A表达量的方法。

本发明小鼠抗人G2A单克隆抗体，其轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。轻链CDR3的序列为EVGLQVPWTSC；重链CDR3的序列为HRTISRTFQKFEI。

本发明检测人巨噬细胞G2A表达量的试剂盒，包括：FITC荧光标记小鼠抗人G2A单克隆抗体和PE荧光标记抗人CD14抗体；

其中，FITC荧光标记的小鼠抗人G2A单克隆抗体为权利要求1中所述的小鼠抗人G2A单克隆抗体。

进一步，本发明检测人巨噬细胞G2A表达量的试剂盒，所述FITC荧光标记小鼠抗人G2A单克隆抗体按以下步骤制备：

一、在4℃将浓度为1mg/mL的小鼠抗人G2A单克隆抗体用交联反应液至pH＝9.0；

二、将FITC按1mg/mL溶于DMSO中；