[发明专利]检测TERT基因启动子C250T、C228T突变位点的方法、引物和试剂盒

权利要求书

1.检测TERT基因启动子C228T、C250T突变位点的引物，其特征在于，所述引物包括扩增 TERT基因启动子C228T、C250T突变位点的正、反向引物，其碱基序列为：

TERT-F：AAGGAAGGGGAGGGGCTGGG

TERT-R：CGACCTCTCTCCGCTGGGGC。

2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物还包括一对测序引物，其碱基序列 为：

TERT-S-F：AAGGAAGGGGAGGGGCTGGG

TERT-S-R：CGACCTCTCTCCGCTGGGGC。

3.如权利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述正、反向引物的使用浓度比为： TERT-F:TERT-R＝1:1。

4.如权利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述一对测序引物的使用浓度比为： TERT-S-F:TERT-S-R＝1:1。

5.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向扩增引物的扩增反应条件为：第 一阶段，95℃预变性10min；第二阶段，变性温度94℃30sec，退火温度64℃90sec，延伸温度 72℃30sec，循环16次，每循环一次，所述退火温度降低0.5℃；第三阶段，变性温度94℃ 30sec，退火温度58℃30sec，延伸温度72℃30sec，循环24次；第四阶段，72℃10min；第五阶 段，扩增反应结束，扩增产物在4℃下保存。

6.一种检测TERT基因启动子C228T、C250T突变位点的方法，其包括如下步骤：

(1)提取样本DNA；

(2)利用一对扩增引物TERT-F和TERT-R对(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物；

(3)利用一对测序引物TERT-S-F和TERT-S-R对(2)中的扩增产物进行测序，获得所述扩 增产物的碱基序列；

(4)将(3)中的碱基序列与TERT基因启动子野生型参考序列TERT-ref进行比较，确定突 变位点是否存在，其特征在于，

TERT-F：AAGGAAGGGGAGGGGCTGGG

TERT-R：CGACCTCTCTCCGCTGGGGC

TERT-S-F：AAGGAAGGGGAGGGGCTGGG

TERT-S-R：CGACCTCTCTCCGCTGGGGC。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)的扩增反应条件为：第一阶段，95℃ 预变性10min；第二阶段，变性温度94℃30sec，退火温度64℃90sec，延伸温度72℃30sec，循 环16次，每循环一次，所述退火温度降低0.5℃；第三阶段，变性温度94℃30sec，退火温度58 ℃30sec，延伸温度72℃30sec，循环24次；第四阶段，72℃10min；第五阶段，扩增反应结束， 扩增产物在4℃下保存。

8.一种检测TERT基因启动子C250T、C228T突变位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒 包括样本DNA抽提试剂；无水乙醇；检测体系PCR反应液、测序体系反应液、阳性对照品、阴性 对照品和空白对照品，其中检测体系PCR反应液包括一对扩增引物TERT-F和TERT-R，测序体 系反应液包括一对测序引物TERT-S-F和TERT-S-R，其特征在于：

TERT-F：AAGGAAGGGGAGGGGCTGGG

TERT-R：CGACCTCTCTCCGCTGGGGC

TERT-S-F：AAGGAAGGGGAGGGGCTGGG

TERT-S-R：CGACCTCTCTCCGCTGGGGC。

9.如权利要求8所示的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括TERT基因启动子野生型参 考序列TERT-ref。

10.如权利要求8至9之一所示的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括测序纯化液， 所述测序纯化液包括虾碱性磷酸酶和核酸外切酶I。