[发明专利]一种橙皮苷酶的生产方法及应用

说明书

本发明公开了一种橙皮苷酶的生产方法及应用，生产方法包括以下步骤：1）、将黑曲霉在麸皮培养基中进行产孢培养形成黑曲霉孢子；2）、黑曲霉孢子在产酶培养基中进行发酵产酶生产橙皮苷酶；3）、分离提取获得酶液；所述黑曲霉保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为KH005，其保藏号为：CGMCC12101。本发明通过采用黑曲霉KH005在产酶发酵培养基中生产的橙皮苷酶具有酶活高、热稳定性好的优点。将本发明所述的黑曲霉KH005应用于酶解法生产橙皮素，为橙皮素的生产提供了新的工艺选择，酶解法反应条件温和，选择性好，橙皮苷母环不易变性，且生产的橙皮素含量高易分离。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及一种橙皮苷酶的生产方法及应用。

背景技术

橙皮苷酶是水解橙皮苷关键酶，具有很高的应用价值。利用橙皮苷酶水解橙皮苷可以得到橙皮素单糖苷、橙皮素、鼠李糖和葡萄糖。此外将橙皮苷酶添加到桔瓣罐头中，水解其中的橙皮苷，可以防止柑桔罐头产生白色沉淀。

橙皮苷酶可由多种微生物产生，如青霉菌、米曲霉、黑曲霉和拟杆菌属等。目前国内关于产橙皮苷酶菌株的研究还比较少，已有报道的产橙皮苷酶的菌株多为霉菌。

在现有采用霉菌生产橙皮苷酶的方法中，由于生产的橙皮苷酶的酶活低、热稳定性差导致生产橙皮苷酶成本比较高，很难达到工业化生产的要求。而橙皮苷酶的酶活的高低与热稳定性的优劣与菌株的选择、培养方法和发酵条件等有关，进而，选择具有优势的菌株，以及设计合适的培养方法和发酵条件是生产酶活高、热稳定性好的橙皮苷酶的关键。

发明内容

本发明目的在于提供一种反应条件温和、选择性好、工艺简单优化的橙皮苷酶的生产方法，解决现有橙皮苷酶的酶活低、酶热稳定性差的问题。

此外，本发明还涉及橙皮苷酶的应用。

本发明通过下述技术方案实现：

一种橙皮苷酶的生产方法，包括以下步骤：

1)、将黑曲霉在培养基中进行产孢培养形成黑曲霉孢子；

2)、黑曲霉孢子在产酶培养基中进行发酵产酶生产橙皮苷酶；

3)、分离提取获得酶液；

所述黑曲霉保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为KH005，其保藏号为：CGMCC12101。

现有的橙皮苷酶的在生产方法通产是采用微生物(主要是指霉菌和真菌)降解橙皮苷获得，虽然能生产橙皮苷酶的菌株有很多，但是现有发现的菌株产橙皮苷酶的能力弱，即生产的橙皮苷酶的酶活低，且橙皮苷酶的热稳定性差，影响橙皮苷酶的酶活和热稳定性的因素除了菌株的选择外，还与发酵反应条件有关。

本申请人通过多次试验，发现了一株新的黑曲霉菌株KH005，将其通过本发明所述工艺步骤生产的橙皮苷酶的效率高，生产的橙皮苷酶的酶活高、热稳定性好；橙皮苷酶的酶活的测定过程如下：

试管中加入5ml pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液、4.5ml浓度为0.2％的橙皮苷底物溶液，在45℃水浴下保温5min，然后加入，0.5ml上述粗酶液，充分摇匀，准确计时，45℃反应20min，再迅速移入沸水浴中灭活10min，采用高效液相色谱法测得剩余底物量，得出底物减少量，从而测出酶活。

计算公式如下:

粗酶液的酶活力(U/ml)＝(b-a)/(20×0.5)；其中，a(μg)为酶解后剩余底物含量；b(μg)为反应前的底物含量。

测定结果表明该粗酶液橙皮苷酶活性为2349-2647U。