[发明专利]一组SNP位点检测黄嘌呤氧化酶过敏预警的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，更具体的，本发明涉及一组黄嘌呤氧化酶过 敏预警SNP位点检测用的引物和试剂盒。

背景技术

高尿酸血症是嘌呤代谢异常，血尿酸生成过多或排泄障碍导致的代谢性疾 病，不仅是痛风的主要危险因素，同时也是代谢综合征的重要组成部分，影响 心脏、肾脏等脏器功能，是高血压、冠心病的独立危险因素，也是慢性肾功能 不全的重要危险因素，对人类健康造成严重危害。

黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase，XOD)是嘌呤分解代谢过程中的一种重要 的酶，它催化次黄嘌呤转化为黄嘌呤及由黄嘌呤形成尿酸的氧化过程，与尿酸 生成增多引起的高尿酸血症及痛风等多种疾病相关。别嘌醇等黄嘌呤氧化酶抑 制剂，可以减少体内尿酸合成，临床应用于高尿酸血症、痛风和痛风性关节炎 等疾病的防治。但这类药物存在严重的超敏反应风险，包括重症渗出性多形红 斑型药疹(Stevens-Johnson综合征，SJS)和中毒性表皮坏死松解症(TEN)，发生率 约5％，约占药疹病例的11.94％，致死率可达30％～50％。研究发现，中国人群 中HLA-B*5801等位基因与黄嘌呤氧化酶抑制剂引起严重皮肤过敏反应强相关。 携带HLA-B*5801等位基因的中国汉族患者服用别嘌醇发生皮肤过敏反应的风 险较未携带有此基因型的汉族人群风险比增加339倍。美国风湿病学会痛风指 南指出中国汉族人和泰国人应用别嘌醇前应做HLA-B*5801等位基因检测。但 由于HLA分型的血清学分型和基因分型各有不足，难以在临床工作中开展检测。 目前国内上市的用于临床检测HLA-B*5801的试剂盒只有2015年引进的台湾世 基生物医学股份有限公司的人类白细胞抗原B位点5801基因检测试剂盒(PCR- 荧光法)，该试剂盒通过检测荧光定量PCR染料法结合溶解曲线技术分析 HLA-B*5801基因，但鉴于HLA-B基因的多态性，难以保证该试剂盒非特异扩 增情况及HLA-B*5801阴性患者的过敏反应。

发明内容

为克服上述提到的内容，本发明提供一种用于检测黄嘌呤氧化酶过敏易感 SNP位点的引物、试剂盒、用于特异性结合PCR产物并指示各个黄嘌呤氧化酶 抑制剂易感基因位点的寡核苷酸信号探针和检测黄嘌呤氧化酶过敏易感SNP位 点特异性捕获探针。

本试剂盒针对人类基因组DNA中黄嘌呤氧化酶过敏易感基因的12个SNP 位点：rs2734583,rs3117583,rs2855804,rs1150793,rs3094011,rs3131643, rs9267445,rs9263726,rs9263733,rs9263745,rs4084090,rs1634776。设计特异性引 物和探针(包括捕获探针和信号探针)，其中特异性引物进行多重复合扩增获得 12个SNP位点的扩增产物；捕获探针用于固定在特制的印刷电路板金电极表面， 制备成黄嘌呤氧化酶过敏易感基因电化学芯片，信号探针标记有二茂铁分子， 用于通过杂交反应捕获PCR多重扩增产物，信号探针与PCR产物特异结合；捕 获探针则是设于印刷电路板的电极表面，制成电化学传感器(芯片)。信号探针 标记有二茂铁分子，会通过夹心杂交产生电流的变化。应用电化学基因芯片分 析系统检测出相应电流值(信号值)，并对各个SNP位点的碱基型别进行判定。

所述的制成电化学传感器(芯片)，制备程序如下：

1、空白电化学基因传感器生物芯片处理工艺：在印刷电路板的电极上均匀 覆盖预混好的银胶，点好银胶的印刷电路板放在恒温干燥箱中95℃60分钟烘 干；等离子处理1分钟。

2、在电极上偶联捕获探针工艺：在等离子处理之后的印刷电路板的金电极 表面点上相应的捕获探针，在85％湿度、温度26.7℃的条件下孵育10～15分 钟。

3、清洗工艺：使用去离子纯化水将印刷电路板表面没有结合的探针溶液冲 洗2分钟，取出置于真空干燥箱中30℃15分钟干燥。

4、成品组装工艺：将塑料板、密封盖及大胶膜、小胶膜按孔上相应位置组 装好，跟烘干好的印刷电路板对准位置在气液增压机上压制成电化学基因传感 器生物芯片，并盖好塑料外壳。

本发明中涉及的引物、信号探针及捕获探针序列如下：