[发明专利]一种山羊BLG基因定点敲除修饰系统及应用

权利要求书

1.一种山羊BLG基因定点敲除修饰系统，其特征在于所述定点敲除修饰系统为剪切山羊BLG基因靶序列的转录激活样效应因子核酸酶TALENs；

所述山羊BLG基因靶序列位于山羊BLG第3外显子(NCBI,emb|Z33881.1|,8088bp)，转录起始位点下游，其中，3959-3974位核苷酸为左臂识别模块，3992-4008位核苷酸为右臂识别模块，3975-3991位核苷酸为间隔序列spacer；

所述的转录激活样效应因子核酸酶TALENs由剪切识别模块TALEN-3-L和剪切别模块TALEN-3-R组成，所述剪切识别模块TALEN-3-L的序列如SEQIDNO.1所示，所述剪切别模块TALEN-3-R的序列如SEQIDNO.2所示。

2.一种山羊BLG基因定点整合系统，所述定点整合系统为人乳铁蛋白打靶载体BLTF-7-82；所述的BLTF-7-82打靶载体由山羊BLG同源臂DNA序列、功能基因hLF及负筛选基因TK组成。

3.一种述山羊BLG基因定向修饰系统的制备方法，其特征在于：

在山羊BLG基因座位点一步法敲除BLG基因部分序列导致BLG表达失活的同时在同一位点整合hLF基因；包括在山羊BLG序列特定位点设计TALENs识别序列和删除序列，并以BLG序列为同源臂，连接功能基因hLF和筛选基因，组成基因打靶载体BLC14-TK的目步骤。

4.一种含有权利要求1所述山羊BLG基因定点敲除系统的重组表达载体、重组菌。

5.权利要求1所述山羊BLG基因定点敲除系统在制备BLG^-/hLF⁺转基因胎儿成纤维细胞中的应用。

6.权利要求1所述山羊BLG基因定点敲除系统在制备BLG^-/hLF⁺基因打靶转基因山羊中的应用。

7.一种BLG^-/hLF⁺基因打靶转基因山羊的制备方法，其特征在于：利用权利要求1所述山羊BLG基因定点敲除修饰系统定点敲除山羊BLG基因和敲入人乳铁蛋白(hLF)基因，获得BLG^-/hLF⁺转基因胎儿成纤维细胞，并应用该细胞作为供核细胞，通过体细胞核移植制备BLG^-/hLF⁺基因打靶转基因山羊。