[发明专利]乙型脑炎减毒活疫苗株SA14-14-2在人二倍体细胞2BS上的适应株及其疫苗

说明书

一种乙型脑炎减毒活疫苗株SA14‑14‑2在人二倍体细胞2BS上的适应株及其疫苗，其特点是，通过将流行性乙型脑炎病毒SA14‑14‑2接种于人二倍体细胞上，通过不同的方式连续传代，使病毒能够在细胞上很好的适应和稳定的增殖，获得较高滴度的病毒，建立病毒的三级毒种库，通过对毒种库全基因序列测定，获得其全基因组序列。对病毒进行有效性和安全性检查，符合规定的乙型脑炎减毒活疫苗的标准。本发明乙型脑炎毒种病毒滴度较高、安全性符合规定、免疫原性良好和遗传稳定，符合《中国药典》第三部(2010版)关于乙型脑炎毒株安全性和有效性的要求，适合作为乙型脑炎疫苗的生产用毒种。

技术领域

本发明属于病毒疫苗领域，特别是以生物学技术选育高度减毒而且免疫原性良好的乙型脑炎活疫苗株。将乙型脑炎减毒活疫苗株SA14-14-2通过单层、混悬的方式接种2BS细胞，传代适应后蚀斑法测定病毒滴度，确定病毒最佳收获时间和接种量。选取病毒滴度较高的三代建立原始毒种、主代毒种和工作毒种库，对毒种库病毒按照《中国药典》三部中进行无菌检查、支原体检查、免疫原性检查，小鼠脑内致病力试验，皮下感染入脑试验、乳鼠传代返祖试验、免疫保护性试验等项目的全面检定。另外还对其进行全基因序列测定并与已上市的原代地鼠肾细胞(PHK)传代的疫苗株SA14-14-2疫苗株的序列进行比对。

背景技术

流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis，乙脑)是亚洲最常见的一种病毒性脑炎，是一种经蚊虫传播的人兽共患病。乙脑病毒属黄病毒科黄病毒属，为单股正链RNA有包膜病毒，全长11kb左右。乙脑病毒有5个基因型，目前我国的乙脑流行病毒为基因Ⅲ型和基因Ⅰ型。据估计，乙脑病毒每年至少造成50,000例临床病例，其中多数为10岁以下儿童，导致约10,000人死亡，另有约15,000例病例留有长期的神经-精神性后遗症。乙脑几乎在所有的亚洲国家都有发生，无论其位于温带、亚热带或热带。近几十年来，乙脑在一些以前无地方性流行的地区出现了爆发。全球有近30亿人口生活在乙脑流行区，这些流行区每年新生儿约7千万。乙脑病毒感染通过蚊子传播，而蚊子从有病毒血症的动物、人获得感染。目前还没有针对乙脑的特异性抗病毒治疗方法，疫苗接种仍是唯一最重要的控制措施。

目前，大规模使用的乙脑疫苗有三种：(1)Nakayama株或北京株纯化鼠脑灭活疫苗，主要日本等几个亚洲国家生产；(2)Vero细胞培养的北京P3株乙脑灭活疫苗；(3)原代地鼠肾细胞培养的SA14-14-2株减毒活疫苗。纯化鼠脑乙脑疫苗的缺点有：诱导保护性免疫力的持续时间过短，需多剂次接种；对多数国家来说，每剂疫苗的价格相对较高。细胞培养的疫苗上世纪90年代前曾经在中国生产并广泛使用。1989年，SA14-14-2株减毒活疫苗上市后，因其安全、有效、免疫接种次数少、保护时间长的优点，在国内大面积接种，市场占有率已达到90％以上，并出口韩国、印度、泰国、尼泊尔等十多个国家。

人二倍体细胞是指正常人体组织在体外培养的细胞，其来源于正常人胚胎，在传代过程中保持二倍体核型，无外源因子污染，无致瘤性，没有传代细胞和原代动物细胞的缺点，在培养病毒和制备病毒类疫苗方面价值很大，是WHO倡导用于人用疫苗生产的理想细胞。60年代初人二倍体细胞问世，70年代用于多种疫苗生产。近来年成为甲肝疫苗、水痘疫苗、风疹减毒活疫苗、脊髓灰质炎疫苗、成纤维细胞干扰素等产品的生产用细胞。WHO认为疫苗的生产应首先考虑采用人源性二倍体细胞，因其与其他动物传代细胞相比，在理论上不存在致肿瘤的危险性，其生产疫苗的安全性及有效性远优于其他细胞基质制备的疫苗。