[发明专利]一种水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3及其应用

权利要求书

1.一种水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3，其特征在于，所述水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3由：

(a)序列表中SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列；或者

(b)序列表中SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列构成，

SEQ ID No:1中所述的核苷酸序列为：

SEQ ID No:2中所述的核苷酸序列为：

2.根据权利要求1所述的水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3，其特征是，所述水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3分离自日本晴水稻的成熟种子，分离所采用的扩增引物包括第一引物和第二引物，所述第一引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示，所述第二引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:4所示。

3.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒包含权利要求1所述的水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3。

4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含权利要求1所述的水稻花粉强特异表达启动子，在所述重组表达载体中，所述水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3连接于载体中待表达的基因序列的上游。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述待表达的基因为Gus基因，所述重组表达载体为pCAMBIA1391-OsPoll3，其中pCAMBIA1391为作物双元表达载体；或者所述待表达基因是具有改善花粉性状功能的基因。

6.一种根据权利要求1所述的水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3在培育转基因水稻中的应用，其特征在于，所述应用包括：将权利要求1所述的水稻花粉强特异表达启动子连接于载体中待表达的基因序列上游，从而构建重组表达载体；将所述重组表达载体转化到水稻细胞、组织或器官中进行培育。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用用于改良作物生长育性，所述作物为水稻。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用包括：

利用序列表SEQ ID No.3和4中的引物，以水稻品种日本晴DNA为模板，扩增权利要求1所述的水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3；

回收目的片段，将其连接到预定载体上，按照热激法转化大肠杆菌感受态细胞后，使感受态细胞激活，进而将目的片段转入到激活的感受态细胞中，然后，经菌落PCR筛选获得阳性克隆，挑取单克隆摇菌液提质粒，用SalI和EcoRI进行双酶切验证，验证正确的克隆即为所要获得的水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3；

从上面获得的阳性克隆中提取质粒，用SalI和EcoRI双酶切，回收水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3片段；

对含有目标基因的载体进行线性化处理、回收载体，将上述的水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3片段和载体片段用T4连接酶进行连接，得到水稻花粉强特异表达启动子OsPoll3与目标基因融合的作物表达载体，利用冻融法将作物表达载体转入根癌农杆菌；

利用农杆菌介导方法，对水稻种子，采用上面所获得的转入了重组表达载体的根癌农杆菌进行农杆菌介导的遗传转化，获得相应水稻植株。