[发明专利]一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法

权利要求书

1.一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：

（1）按重量份数计，分别选取30～40份葡萄糖，10～15份蛋白胨，5～8份磷酸氢二钠，2～4份磷酸二氢钾，0.5～1.2份氯化钾，3～5份酵母浸膏和30～50份去离子水，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值为7.0，在105～110℃和0.1MPa下灭菌处理10～15min得发酵培养基；

（2）向上述发酵培养基中加入培养基体积8～12%棘孢青霉菌种子液和培养基体积10～15%醋杆菌种子液，放入37℃恒温摇床培养中，在200～220r/min下培养15～20h，将培养后的发酵液在4℃和5000～7000r/min转速下离心分离12～15min，收集沉淀物，将沉淀物按固液比1:2加入去离子水，得菌体悬浮液；

（3）将上述菌体悬浮液按体积比1:1加入pH6.8浓度0.05mol/LHAC-NaAC缓冲液，混合后在0℃和250～300W下超声破碎15～20min，每破碎2s，间隔2s，超声破碎后再在4℃和10000～12000r/min条件下离心分离15～20min，去除沉淀物，得上清液即菌液；

（4）取50～80mL质量分数3～5%卡拉胶溶液，将卡拉胶溶液和菌液按体积比1:1混合，将混合液缓慢滴加到质量分数5～8%的氯化钙溶液中，控制在50～60min滴完，滴加同时在250～350r/min转速下搅拌，滴加后再搅拌固定25～35min，固定后加入总体积5～8%戊二醛进行交联1～2h，形成卡拉胶钙珠，将卡拉胶钙珠按固液比1:5放入pH6.5磷酸盐缓冲液中静置过夜，过滤，将过滤物用蒸馏水洗涤2～3次，即可得到右旋糖酐酶固定化细胞微球；

（5）将上述右旋糖酐酶固定化细胞微球按体积5～10%转接量接至底物溶液中，在27℃和100～150r/min恒温摇床中反应18～20h，反应结束后用质量分数80%乙醇按体积比3:1混合进行沉淀，将沉淀物放入质量分数90%乙醇中捏洗2～3次，捏洗后的过滤物放入烘箱中在70～80℃下干燥5～6h即可。

2.根据权利要求1所述的一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法，其特征在于：所述的底物溶液是每升水中含100～120g蔗糖，1.7～2.2g蛋白胨，1.8～2.2g磷酸氢二钠，0.02～0.05g氯化钙和0.003～0.006g硫酸镁配比组成。