[发明专利]微囊化免疫细胞冻存与复苏方法

权利要求书

1.一种微囊化免疫细胞冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取免疫细胞；

将所述免疫细胞与用于制作微囊的囊材混合进行微囊化处理，获得微囊化免疫细胞；

将所述微囊化细胞置于细胞冻存液中进行冻存。

2.根据权利要求1所述的微囊化免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述囊材为壳聚糖或海藻酸-聚赖氨酸。

3.根据权利要求2所述的微囊化免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述囊材为海藻酸-聚赖氨酸，且所述微囊化处理的过程包括以下步骤：

将所述免疫细胞和海藻酸溶液混合搅拌至免疫细胞浓度为(0.5～2)×10⁷个/ml，逐滴加入氯化钙溶液中，形成凝胶球后，加入聚赖氨酸包埋。

4.根据权利要求3所述的微囊化免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述聚赖氨酸包埋的时间为1～12分钟。

5.根据权利要求4所述的微囊化免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述聚赖氨酸包埋后，还包括采用有机酸溶液液化微囊的步骤。

6.根据权利要求1所述的微囊化免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述细胞冻存液包括二甲基亚砜、人血清和AIM-V培养基。

7.根据权利要求6所述的微囊化免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述AIM-V培养基中，二甲基亚砜的体积分数为5～15％，人血清的体积分数为5～15％。

8.根据权利要求1所述的微囊化免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述冻存过程，还包括以下步骤：

将置于所述细胞冻存液中的微囊化免疫细胞温度降至-60～-100℃后，置于-170～-200℃温度下冻存。

9.一种微囊化免疫细胞冻存后的复苏方法，其特征在于，将权利要求1～8任一项所述的冻存后微囊化免疫细胞进行复苏的过程，包括以下步骤：

将冻存后的微囊化免疫细胞以20～40℃/min的速度升温至-100℃，然后置于含有体积分数为20％～40％二甲基亚砜的水溶液中迅速升温至融化。

10.根据权利要求9所述的微囊化免疫细胞冻存后的复苏方法，其特征在于，微囊化免疫细胞解冻之后，于室温下将微囊化免疫细胞放入磷酸盐缓冲液中稀释，逐步透出二甲基亚砜，离心弃上清，洗涤，加入无血清培养基进行培养。