[发明专利]CIK细胞培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种CIK细胞培养基及其应用。

背景技术

细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的全新的抗肿瘤治疗方法， 弥补了传统的手术、放疗、化疗的弊端，已经被公认为二十一世纪肿瘤综合 治疗模式中最活跃、最有发展前途的一种治疗手段,也是世界目前唯一有希望 完全消灭肿瘤细胞的治疗手段。免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答相 关的细胞，包括淋巴细胞、树突状细胞、单核/巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞 等。

CIK(cytokine-inducedkiller，中文名：[自体细胞免疫疗法]多种细胞因 子诱导的杀伤细胞)是单个核细胞在抗CD3单克隆抗体和多种细胞因子的 作用下培养获得的一群异质细胞群，其中CD3⁺，CD56⁺淋巴细胞是主要效 应细胞。CIK可直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞；诱导肿瘤细胞凋亡； 通过释放大量炎性细胞因子抑制或杀伤肿瘤细胞。CIK细胞具有增殖速度 快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感、对正常骨髓 造血前体细胞细胞毒性小等特点，是目前发现的杀伤肿瘤细胞活性强，适 合临床应用的一种理想的效应细胞，但这种效应细胞在正常外周血中极其 少见，仅为1％～5％。由此可见，就免疫细胞治疗来说，如何获得足够 数量的、免疫活性强的效应细胞是保证治疗效果的必备条件。

CIK细胞能通过体外诱导而大量增殖，常规的CIK制备方法是将分离 的外周血单个核细胞加入培养液中，通过添加细胞生长因子进行刺激诱导， 最终获得一定数量的CIK细胞，但最终获得的CD3⁺和CD56⁺CIK细胞数 量及杀伤活性都不够理想。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中CIK细胞培养基存在扩 增效率差，细胞杀伤活性低等缺陷，提供一种能够提高CIK细胞扩增效率、 尤其是提高CD3⁺和CD56⁺CIK细胞数量，提高杀伤活性的CIK细胞培养基。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种CIK细胞培养基， 包括PPP、IL-2、IL-12、IL-27和无血清基础培养基。

在本发明提供的CIK细胞培养基中，所述无血清基础培养基为AIM-V培 养基。

在本发明提供的CIK细胞培养基中，所述无血清基础培养基中，PPP的 体积分数为3～5％，IL-2的浓度为800～1200IU/ml，IL-12的浓度为 800～1200IU/ml，IL-27的浓度为5～30ng/ml。

在本发明提供的CIK细胞培养基中，所述无血清基础培养基中，IL-27的 浓度为15～25ng/ml。

在本发明提供的CIK细胞培养基中，所述无血清基础培养基中，PPP的 体积分数为4％，IL-2的浓度为1000IU/ml，IL-12的浓度为1000IU/ml，IL-27 的浓度为18ng/ml。

本发明进一步保护上述的CIK细胞培养基在CIK细胞培养过程中的应 用。

实施本发明提供的CIK细胞培养基，可以达到以下有益效果：采用IL-27 联合IL-2和IL-12，不仅能够降低大剂量细胞因子带来的毒副作用，而且能够 提高CIK的扩增率，尤其是CD3⁺和CD56⁺CIK细胞，提高其杀伤活性。

具体实施方式

本发明提供的CIK细胞培养基，包括PPP(PoorPlateletPlasma，乏血小 板血浆)、IL-2(Interleukin，白介素2)、IL-12(Interleukin，白介素12)和 IL-27(Interleukin，白介素27)；优选地，无血清基础培养基为AIM-V培养 基，购于美国Gibco公司。

其中，白细胞介素-27，能够显著促进CIK细胞的增殖，并能够诱导初始 CD4⁺T细胞表达IL-12β2受体，使其获得对IL-12的反应性，IL-27协同IL-12 诱导T淋巴细胞产生IFN-γ。