[发明专利]ITS序列作为DNA条形码在鉴定嘉兴槜李中的应用及鉴定方法

说明书

本发明公开了ITS序列作为DNA条形码在鉴定嘉兴槜李中的应用及鉴定方法，属于分子鉴定技术领域。所述鉴定方法包括：利用PCR扩增待测样品的ITS序列并进行测序，如果ITS序列的165bp碱基为“T”、195bp碱基为“T”，则判定待测样品为嘉兴槜李。本发明还公开了一种鉴别嘉兴槜李早熟品种和晚熟品种的方法，如果ITS序列的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，则判定待测样品为嘉兴槜李早熟品种；如果ITS序列的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，则判定待测样品为嘉兴槜李晚熟品种。本发明利用ITS序列作为DNA条形码鉴定嘉兴槜李，检测准确性高、可重复性高，鉴定时间短。

技术领域

本发明涉及分子鉴定技术领域，尤其涉及ITS序列作为DNA条形码在鉴定嘉兴槜李中的应用及鉴定方法。

背景技术

槜李(Prunus salicina Lindl.)是蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus L.)植物，是浙江省嘉兴市特产，也是浙江省传统名果。槜李品质细腻鲜润，完熟时能化成甘甜略带酒香的浆液，风味品质极佳，是夏季消费者喜爱的优质水果之一。目前除浙江嘉兴的桐乡、海宁、海盐、湖州等地有槜李栽培外，在江苏省和安徽省也有少量引种。

槜李多采用嫁接繁殖，在不同栽培区域进行引种嫁接，极易造成同名异物及同物异名的现象。另外槜李受不同栽培管理方法、土壤及气候条件的影响，果实在成熟期的生物学特性及品质外观方面呈现一定的差异，市场上鱼目混珠给消费者带来极大困惑。

传统的植物分类方法是借助于对植物形态构造、生活习性等进行比较研究，随着科技的不断进步，植物分类方法逐步发展到分子生物学方法。目前，尚无关于嘉兴槜李分子鉴定的文献报道，关于槜李的研究多集中在栽培及低坐果率方面。由于槜李的果实外观受不同栽培管理方法、土壤及气候条件的影响，果实色泽往往不同，仅仅依靠果实形态来区分槜李与其他品种李难度较大，依靠传统的形态分类学方法在嘉兴槜李的鉴别上存在局限性。鉴于嘉兴槜李在地方特产及农业领域的重要地位，针对嘉兴槜李建立一套可靠的分子鉴别方法势在必行，对于嘉兴槜李的种质资源保护具有重要意义。

DNA条形码(DNA barcoding)技术是利用标准的、具有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段在物种内的特异性和物种间的多样性而创建的一种新的生物身份识别系统，可实现对物种的快速自动鉴定。该技术已被成功应用于生物物种分类和鉴定等领域，并成为进展最迅速的学科前沿之一。

DNA条形码技术研究中常用的DNA序列有matK、trnH-psbA、rbcL和ITS等。核基因组的ITS区位于18S和26S rRNA基因之间，被5.8S rRNA基因分为两段，即ITS1和ITS2，是核糖体DNA(nrDNA)转录单位的一部分。在被子植物中，ITS区具有长度保守性和核苷酸序列的高度变异性，使得这些间隔区的DNA序列较为容易排序，而高度变异性可以为重建较低分类阶元的系统发育提供分子证据。ITS序列区间已经广泛地应用于植物分类、起源、进化等方面的研究。

现有研究报道中，王化坤等选择桃、李、梅、杏、樱桃各2～4个主要种或变种共16个基因型测定其ITS序列，与从GenBank下载的6个核果类果树ITS序列形成了较为全面的数据矩阵。采用二次置根法用樱桃置根，用PAUP软件计算数据集在56个进化模型的得分，Modeltest筛选最佳模型和参数，计算遗传距离、变异，用最大简约法构建了桃、李、梅、杏、樱桃的系统发育树。

发明内容

本发明通过实验研究发现嘉兴槜李的ITS序列的第165位和第195位的碱基与其他品种存在差异，基于以上发现，本发明提供了ITS序列作为DNA条形码在鉴定嘉兴槜李中的应用。

ITS序列作为DNA条形码在鉴定嘉兴槜李中的应用，所述ITS序列的碱基序列如SEQID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

嘉兴槜李早熟品种的ITS序列如SEQ ID NO.1所示，晚熟品种的ITS序列如SEQ IDNO.2所示。