[发明专利]一种由系列培养基组成的试剂盒及其在大豆遗传转化中的应用

权利要求书

1.一种用于大豆遗传转化的试剂盒，包括恢复培养基、筛选培养基、伸长培养基和生根培养基；

所述恢复培养基中含有45-55mg/L L-天冬酰胺、45-55mg/L L-谷氨酰胺、28-32mg/LEDTA盐和11-13mg/L FeSO₄；

所述筛选培养基中含有45-55mg/L L-天冬酰胺、45-55mg/L L-谷氨酰胺、28-32mg/LEDTA盐和11-13mg/L FeSO₄；

所述伸长培养基中含有45-55mg/L L-天冬酰胺、45-55mg/L L-谷氨酰胺、28-32mg/LEDTA盐和11-13mg/L FeSO₄；

所述生根培养基中含有45-55mg/L L-天冬酰胺和45-55mg/L L-谷氨酰胺。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括发芽培养基和/或液体培养基和/或共培养培养基；所述液体培养基为用于重悬农杆菌以制备侵染菌液的培养基。

3.权利要求1或2所述试剂盒在大豆遗传转化中的应用。

4.一种大豆遗传转化的方法，包括如下步骤：

（1）将大豆外植体置于侵染菌液中室温浸泡；所述侵染菌液为重组农杆菌菌悬液；所述重组农杆菌通过将含有目的基因的重组表达载体导入出发农杆菌得到；

（2）完成步骤（1）后，取外植体，在共培养培养基上进行培养；

（3）完成步骤（2）后，取外植体，在权利要求1中所述的恢复培养基上进行培养；

（4）完成步骤（3）后，取外植体，在权利要求1中所述的筛选培养基上进行培养；

（5）完成步骤（4）后，取外植体，切除子叶部分，将丛生芽转接到权利要求1中所述的伸长培养基上，培养至丛生芽伸长3-4cm；

（6）完成步骤（5）后，取植株，剪取茎基部以上部分，先用吲哚丁酸溶液浸泡茎基部，然后在权利要求1中所述的生根培养基上培养至生根。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述大豆外植体为大豆子叶节外植体。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述步骤（1）中，所述出发农杆菌为根癌农杆菌EHA101。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述步骤（1）中，所述重组表达载体是将目的基因插入植物表达载体得到的。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述植物表达载体为pTF101.1载体。

9.如权利要求4至8中任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤（2）中，所述培养的条件为：温度为22℃，时间为5天；

所述步骤（3）中，所述培养的条件为：温度为25℃，时间为7天；

所述步骤（4）中，所述培养的条件为：温度为25℃，时间为21天；

所述步骤（5）中，所述培养的条件为：温度为25℃；

所述步骤（6）中，所述培养的条件为：温度为25℃。

10.权利要求1或2所述试剂盒在大豆育种中的应用。

11.权利要求4至9中任一所述的方法在大豆育种中的应用。