[发明专利]血清中DCD的Elisa检测方法

权利要求书

1.血清中DCD的Elisa检测方法，包括以下步骤：

1)配制标准溶液：取标准样品，加稀释缓冲液配制一组梯度浓度的标准溶 液；

2)取样：将DCD抗体预包被于孔板；分别取标准溶液和血清样本加至板孔 后依次加入生物素标记抗体；取TMB显色液加入板孔作为对照孔；孔板加上盖， 反应；

3)加含HRP的亲和素：加入洗涤液洗涤，将含HRP的亲和素加入除对照 孔以外的板孔，反应；

4)显色检测：加入洗涤液洗涤，加入TMB显色液，反应；加入TMB终止 液；酶标仪在450nm测定O.D.值；以浓度为横坐标、以步骤1)的标准溶液的 O.D.值为纵坐标作标准曲线；

5)计算浓度：通过标准曲线计算血清样本中DCD的浓度。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，DCD抗体的获得方法如下： 向成年小鼠或大鼠以0.1-0.5mL/kgb.w.的剂量皮下注射DCD进行免疫，第5天 以同样的剂量再次免疫，第15天收集存活小鼠或大鼠的血清，凝胶电泳分离出 DCD抗体。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述洗涤液为质量分数为 10-20％的吐温水溶液。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述稀释缓 冲液为PBS缓冲液或Tris-HCl缓冲液。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤2)中，血清样本是 经稀释缓冲液稀释1-100倍的血清样本。