[发明专利]七重PCR快速筛查检测商业化应用转基因油菜的引物及检测方法

权利要求书

1.七重PCR快速筛查检测商业化应用转基因油菜的引物，其特征在于，包括以下引物序列：

pat-F：5'-CGCGGTTTGTGATATCGTTAAC-3'；

pat-R：5'-TCTTGCAACCTCTCTAGATCATCAA-3'；

CruA-F：5'-GGCCAGGGCTTCCGTGAT-3'；

CruA-R：5'-CTGGTGGCTGGCTAAATCGA-3'；

P-FMV35S-F：5'-CAGCATTCCAGATTGGGTTCA-3'；

P-FMV35S-R：5'-CTTTTGGCTAATGGTTTGGAGAC-3'；

T-NOS-F：5'-GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3'；

T-NOS-R：5'-TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'；

P-CaMV35S-F：5'-GCTCCTACAAATGCCATCATTGC-3'；

P-CaMV35S-R：5'-GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC-3'；

CP4-EPSPS-F：5'-GACTTGCGTGTTCEGGCTT-3'；

CP4-EPSPS-R：5'-AACACCGTTGAGCTTGAGA-3'；

bar-F:5'-GAAGGCACGCAACGCCTACGA-3'；

bar-R:5'-CCAGAAACCCACGTCATGCCA-3'。

2.七重PCR快速筛查检测商业化应用转基因油菜的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）合成以下引物：

pat-F：5'-CGCGGTTTGTGATATCGTTAAC-3'；

pat-R：5'-TCTTGCAACCTCTCTAGATCATCAA-3'；

CruA-F：5'-GGCCAGGGCTTCCGTGAT-3'；

CruA-R：5'-CTGGTGGCTGGCTAAATCGA-3'；

P-FMV35S-F：5'-CAGCATTCCAGATTGGGTTCA-3'；

P-FMV35S-R：5'-CTTTTGGCTAATGGTTTGGAGAC-3'；

T-NOS-F：5'-GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3'；

T-NOS-R：5'-TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'；

P-CaMV35S-F：5'-GCTCCTACAAATGCCATCATTGC-3'；

P-CaMV35S-R：5'-GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC-3'；

CP4-EPSPS-F：5'-GACTTGCGTGTTCEGGCTT-3'；

CP4-EPSPS-R：5'-AACACCGTTGAGCTTGAGA-3'；

bar-F:5'-GAAGGCACGCAACGCCTACGA-3'；

bar-R:5'-CCAGAAACCCACGTCATGCCA-3'；

（2）制备待测DNA稀释液；

（3）配制PCR反应体系；

（4）进行PCR检测；

（5）取PCR反应产物进行毛细管电泳。

3.根据权利要求2所述的七重PCR快速筛查检测商业化应用转基因油菜的方法，其特征在于，步骤（1）中pat引物的浓度为0.3μmol/L，CruA引物的浓度为0.05μmol/L，P-CaMV35S引物和bar引物的浓度为0.15μmol/L，CP4-EPSPS引物的浓度为0.25μmol/L，P-FMV35S引物和T-NOS引物的浓度均为0.2μmol/L；步骤（2）所述制备的DNA稀释液的浓度为50ng/μL。

4.根据权利要求2或3所述的七重PCR快速筛查检测商业化应用转基因油菜的方法，其特征在于，所述PCR反应条件为：94℃变性5min；然后进入35个循环，94℃30s，56℃30s，72℃30s；循环结束后72℃延伸3min。

5.根据权利要求4所述的七重PCR快速筛查检测商业化应用转基因油菜的方法，其特征在于，引物退火温度为58℃。