[发明专利]一种HPV18 E6单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种HPV18 E6单克隆抗体及其制备方法和应用，本发明利用生物信息学人工选择优势抗原表位肽，该多肽与BSA偶联后免疫原性良好，用该多肽制备的抗体效价高达10⁶，本发明还对HPV18E6蛋白进行了原核表达，Westernbolt结果表明本发明制备的HPV18E6多肽抗体可与HPV18 E6蛋白特异性结合，可用于Westernbolt检测，应用价值较高。本发明成功预测了HPV18 E6的多肽抗原表位，获得了理想的多肽片段，同时制备了相应的单克隆抗体，该抗体可以特异性识别HPV18E6抗原，为研究该蛋白的研究以及HPV18检测方法的建立奠定了基础，促进了HPV18相关疾病的诊断和治疗。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体制备领域，尤其涉及一种HPV18 E6单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

HPV是引起宫颈癌及其癌前病变的主要因素，是唯一可以完全确认的致癌病毒。目前研究已经证实，几乎所有宫颈癌患者的宫颈组织内都可检测到高危型的HPV，在我国妇女宫颈癌组织中HPV感染率大于95％。其中高危型HPV 18是常见高致病性HPV之一。E6蛋白是人乳头瘤病毒编码的主要早期蛋白之一，在子宫颈恶性病变的发生和发展中起重要作用。研究表明宫颈癌组织以及血液中都存在HPV抗原、抗体，肿瘤的发生与HPV E6表达增加有关，Garcia、Rubenstein等对HPV16 E6抗体进行检测，HPV 16E6有助于评估宫颈癌的发生的危险性，认为HPV病毒E6检测可作为宫颈癌诊断、疗效观察和预后的标志物。然而目前对于HPV18 E6抗原抗体的检测研究还较少，因此表达HPV18E6抗原、制备特异性针对HPV18E6抗体对于具重大意义。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题，设计HPV18 E6特异性优势抗原表位肽，提供一种制备高特异性HPV18 E6单克隆抗体的方法及其相关应用。

本发明第一个方面提供了一种HPV18 E6单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤，

步骤一，合成序列如SEQ NO.1的HPV18 E6特异性多肽，并与蛋白载体偶联获得蛋白载体偶联的HPV18 E6特异性多肽；

步骤二，免疫，采用的抗原为所述步骤一中得到的蛋白载体偶联的HPV18 E6特异性多肽；

步骤三，细胞融合，得到杂交瘤细胞；

步骤四，对所述步骤三得到的杂交瘤细胞进行阳性克隆的筛选，得到特异性HPV18E6单克隆抗体杂交瘤细胞；

步骤五，利用步骤四所得的特异性HPV18 E6单克隆抗体杂交瘤细胞制得HPV18 E6单克隆抗体。

为了进一步优化上述技术方案，本发明所采取的技术措施还包括：

优选地，上述步骤一中蛋白载体为BSA或KLH，HPV18 E6特异性多肽与蛋白载体欧联后获得BSA-HPV18 E6或KLH-HPV18 E6。

优选地，上述步骤二中免疫使用8周龄BALB/C小鼠，免疫过程为：首次免疫使用BSA-HPV18E6，注射剂量为0.05mg/只，加完全福氏完全佐剂；然后每2周加强免疫1次，注射剂量0.05mg/只，加福氏不完全佐剂；如此加强免疫3次，再间隔2周后使用0.05mg BSA-HPV18 E6水剂作冲击免疫。

优选地，上述步骤四中阳性克隆的筛选为以KLH-HPV 18 E6为抗原包被的酶标板，间接ELISA法筛选阳性克隆。

本发明第二个方面提供一种根据上述的制备方法制备得到的HPV18 E6单克隆抗体。