[发明专利]一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织培养改良技术，具体是一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法。

背景技术

植株再生是进行遗传转化的前提，提高胚性愈伤组织再生率将有助于利用基因工程进行作物遗传改良。甘薯组织培养高频率植株再生是进行甘薯遗传转化的重要一步。一般认为，甘薯植株再生比较困难。截至目前，前人研究表明胚性愈伤组织再生率为50-60%，个别品种可以达到90%，平均单块愈伤再生植株2株；为加快通过甘薯体细胞杂交及基因工程进行甘薯遗传改良，胚性愈伤再生率还有待进一步提高，基因型还需进一步拓宽，以及单块愈伤的再生植株数还需提高。

发明内容

本发明提供一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法，通过利用这一再生方法，较当前主要培养方法培养的胚性愈伤组织再生率可以提高10%以上，并且拓宽了基因型范围，单块愈伤的植株再生数可达8-10株，显著提高了胚性愈伤再生率和单块愈伤出苗量。

本发明是通过如下技术方案实现的：一种胚性愈伤组织再生的方法，将经过继代培养的胚性愈伤组织，挑选色泽鲜亮、长势较好的接种于分化培养基；接种于分化培养基后，于28±1℃，光照10 小时/天条件下培养15天；然后将培养的胚性愈伤转移至再生培养基中，继续培养；挑选再生的子叶胚或者再生小植株接种于低渗培养基，完成植株再生

所述的挑选经过继代、色泽鲜艳、长势较好的胚性愈伤组织接种于分化培养基，MS基本培养基+ABA 1mg/L+ZT 1.0 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L，灭菌前调PH：5.8-6.0；进行培养的，这一配方是在前期大量预试验及基础工作基础上，积极引进ZT，同ABA协同作用，可以显著提高胚性愈伤组织再生率。

所述的接种于分化培养基培养15天后，将其转入再生培养基（MS基本培养基+ZT 0.5 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L）继续培养，而前人的操作是直接转入MS培养基，相对于前人方法，本方法可以显著提高单块愈伤出苗量，无需离体繁殖，一次性可以获得足够基础再生苗。

所述的将再生的子叶胚或再生小植株转入低渗培养基（MS基本培养基+蔗糖 20g/L+ Phytagel 2.5g/L），就是为了促进子叶胚的快速萌发，以及再生植株的快速生根，为获得壮苗奠定基础。

本发明的有益效果是：通过这一再生方法，可显著促进体细胞胚的发育，获得较多子叶胚及再生植株，胚性愈伤组织再生率提高了10%以上，单块愈伤再生植株数显著增加，该方法重复性好，便于操作；这一再生技术的改进，将有助于优异基因的利用，促进甘薯遗传改良。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的方法和效果，但不限制本发明的保护范围。

实施例1

1.试验材料和方法

1.1试验材料：甘薯品种：商薯19

1.2试验方法：所选试验材料为继代培养的商薯19胚性愈伤，挑选色鲜艳、状态较好的接种于分化培养基（MS基本培养基+ABA 0-2 mg/L+ZT 0-1.5 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L，灭菌前调PH：5.8-6.0），培养15d，促进体细胞胚胎发育；而后将其转入再生培养基中（MS基本培养基+ZT 0-1.0 mg/L+蔗糖 30 g/L+ Phytagel 2.5g/L，灭菌前调PH：5.8-6.0）培养；挑选发育的子叶胚获再生小植株接种于低渗培养基（MS基本培养基+蔗糖 20g/L+ Phytagel 2.5g/L）。每个重复接种20块胚性愈伤，设三次重复。培养条件为：（28±1）℃，日光灯冷光源强度为2400Lux。

调查及数据统计：培养30 d后，统计植株再生率和单块愈伤成苗数。

结果与分析

2.1不同分化培养基对胚型愈伤组织再生的影响

在分化培养基培养15 d，转入低渗培养基，再培养30 d后，胚性愈伤已分化出子叶胚，甚至小植株，具体结果见表1：与对照相比，分化培养基中添加ABA、ZT均有助于植株再生；尤其，ABA和ZT的相互作用可以有效促进植株再生；在本试验中，添加ABA1mg/L和ZT 1mg/L植株再生率最高，达85.0%，

表1：不同分化培养基对植株再生率的影响