[发明专利]六味石榴片在制备抑制皮肤黑色素瘤细胞SK-HEL-1细胞增殖药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种六味石榴片在制备抑制皮肤黑色素瘤细胞SK-HEL-1细胞增殖药物中的应用及六味石榴片的制备方法。

背景技术

六味石榴胶囊标准号WS-10474（ZD-0474）-2002，记载于国家中成药标准汇编外科妇科分册。由石榴子90g、肉桂45g、肉豆蔻45g、胡椒45g、红花45g、大托叶云实45g作为原料药制成，具有温肾，暧腰膝的功效。用于妇女白带病。

现有技术中，尚未有六味石榴片在在制备抑制人皮肤黑色素瘤细胞SK-HEL-1细胞增殖药物中的应用的报道，也未见有六味石榴片提取制备方面采用超临界萃取的报道，而传统粉碎的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于提供一种六味石榴片在制备抑制皮肤黑色素瘤细胞SK-HEL-1细胞增殖药物中的应用。

本发明的另一个目的在于提供一种六味石榴片的制备方法。

本发明的目的是通过如下的方案实现的：

六味石榴片在制备抑制皮肤黑色素瘤细胞SK-HEL-1细胞增殖药物中的应用，所述六味石榴片由石榴子90g、肉桂45g、肉豆蔻45g、胡椒45g、红花45g、大托叶云实45g作为原料药制成，所述六味石榴片的制备方法包括如下步骤：取石榴子90g、肉桂45g、肉豆蔻45g、胡椒45g、红花45g、大托叶云实45g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO₂流量l-3ml/g生药·min，萃取时间300-400min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制胶囊，干燥，压片，制成500片，每片重0.30g。

优选的，上述的六味石榴片在制备抑制皮肤黑色素瘤细胞SK-HEL-1细胞增殖药物中的应用，所述六味石榴片的制备方法包括如下步骤：取石榴子90g、肉桂45g、肉豆蔻45g、胡椒45g、红花45g、大托叶云实45g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40℃，CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间350min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制胶囊，干燥，压片，制成500片，每片重0.30g。

现有技术中，六味石榴胶囊口服，一次5粒，一日3次。六味石榴胶囊服药量大。采用本发明方法制备成的六味石榴片每片重0.30g，每次仅需1片，一日服用3次。在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。

试验一、不同方法制备的六味石榴片中胡椒碱含量的比较

l、仪器及试药本发明六味石榴片：按实施例1方法制备，使用315g原料药，经提取制成500片，每片重0.30g。原六味石榴胶囊，按照WS-10474（ZD-0474）-2002标准方法制备。Agilent1200高效液相色谱仪；METTLERAE240电子分析天平；胡椒碱对照品（中国药品生物制品检定所）。

2、方法

照高效液相色谱法（中国药典2015年版第四部凡例十五）测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（77∶23）为流动相；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备精密称取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

本发明的六味石榴片的供试品溶液的制备取本发明的六味石榴片6g，混匀，取0.12g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇40ml，超声处理30分钟，放冷，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照产品供试品溶液的制备取对照六味石榴胶囊6g，混匀，取0.3g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇40ml，超声处理30分钟，放冷，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

3、结果

结果表明，本发明六味石榴片中胡椒碱的含量为4.10-8.05mg/片；而原六味石榴胶囊中胡椒碱的含量为0.81mg/粒，每次服用量2片的胡椒碱含量为原胶囊剂5粒含量的2-4倍，在服用量减少的情况下，胡椒碱含量有很大提高。