[发明专利]一种禽网状内皮增生症病毒亚单位疫苗注射复合物及其制备方法有效
| 申请号： | 201610191956.3 | 申请日： | 2016-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN105664151B | 公开（公告）日： | 2021-06-29 |
| 发明（设计）人： | 郭慧君;袁霏;李宏梅 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | A61K39/21 | 分类号： | A61K39/21;A61K39/39;A61P31/14 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种禽 网状 内皮 增生 病毒 单位 疫苗 注射 复合物 及其 制备 方法 | ||
1.一种禽网状内皮增生症病毒亚单位疫苗注射复合物，其特征在于，包括禽网状内皮增生病毒亚单位疫苗抗原和核酸缓释佐剂，
其中所述的禽网状内皮增生病毒亚单位疫苗抗原为gp90蛋白抗原，其制备方法是通过设计的特异性引物：
上游引物：5-CCGGAATTCTCCTCCATACCTACCTATTACA-3 '其核苷酸序列如Seq ID No:1所示；
下游引物：5-AGAGTCGACTCAATTAGGGAGTGCCGTGT-3其核苷酸序列如Seq ID No:2所示；
扩增REV囊膜蛋白gp90的基因，构建包含gp90基因的原核表达质粒重组质粒REV-gp90-pET32a，经诱导表达纯化后获得；具体步骤如下：
纯化后的gp90蛋白抗原用PBS稀释至1.0mg/mL，之后按蛋白抗原：免疫佐剂按体积比1：1混合，于振荡器上震荡1小时后，使用超声破碎仪进行乳化，超声乳化的条件为：功率为350W，工作时间3s，间歇时间2s，温度控制在25℃，至乳化完全后停止超声；
所述的核酸缓释佐剂其包括如下组分：全硫代修饰的5‘-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’核酸分子，其核苷酸序列如Seq ID No:3所示； 7号白油；硬脂酸铝和司本80，其制备方法如下：
7号白油和司本80分别按94%和6%体积比混合，之后将硬脂酸铝按2%质量比加入到上述混合物中，116℃高压灭菌，冷却至50℃，用力振摇至透明状；
之后再按100μg/mL添加的上述全部硫代化修饰的CpG-ODN，混匀，制备成油乳状。
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