[发明专利]一种酵母表达的鸡Cathelicidin2抗菌肽及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 201610192035.9 | 申请日： | 2016-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN105753959A | 公开（公告）日： | 2016-07-13 |
| 发明（设计）人： | 黄兵;于可响;马秀丽;刘存霞;吴静;刘玉山;胡峰;李玉峰;宋敏训 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院家禽研究所（山东省无特定病原鸡研究中心） |
| 主分类号： | C07K14/465 | 分类号： | C07K14/465;C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;A61K38/17;A61P31/04;C12R1/84 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 250023 *** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 酵母 表达 cathelicidin2 抗菌 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组鸡Cathelicidin2抗菌肽，其特征在于：其成熟肽包含如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。
2.一种编码权利要求1所述的重组鸡Cathelicidin2抗菌肽的基因，其特征在于：其包含如SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。
3.一种含有权利要求2所述重组鸡Cathelicidin2抗菌肽基因的表达载体。
4.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为重组质粒pPICZαA-CathL2。
5.一种含有权利要求3或4所述的表达载体的重组菌，其特征在于：所述的重组菌为生产鸡Cathelicidin2抗菌肽的毕氏酵母工程菌。
6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌为分泌型重组酵母表达菌株X-33/pPICZαA-CathL2。
7.一种构建权利要求5或6所述重组菌的方法，其特征在于：将权利要求3或4所述的表达载体导入毕氏酵母宿主菌株，以使所述表达载体在所述宿主中有效表达。
8.根据权利要求7所述的构建所述重组菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以成年乌骨鸡骨髓RNA为模板，扩增其Cathelicidin2成熟肽的编码序列，克隆至pMD18-T载体中，筛选阳性克隆并测序验证；
(2)将Cathelicidin2成熟肽的编码序列与分泌型酵母表达载体pPICZαA相连接，筛选阳性克隆，并大量制备阳性质粒pPICZαA-CathL2；
(3)将pPICZαA-CathL2重组质粒经酶切线性化后利用电穿孔导入PichiapastorisX-33宿主细胞基因组中，获得分泌型重组酵母表达菌株X-33/pPICZαA-CathL2；并将转化子经甲醇利用表型的MM/MD平板筛选，得到能够正常利用甲醇的重组酵母菌株。
9.一种权利要求1所述重组鸡Cathelicidin2抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)按照权利要求7或8所述方法构建所述重组菌；
(2)用蜗牛酶提取法制备所述重组菌的DNA模板，采用PCR方法筛选阳性转化子；
(3)将筛选到的阳性酵母菌株进行甲醇诱导表达，并对诱导表达条件进行优化；
(4)取不同时间段内的表达上清液，利用DOC-TCA蛋白浓缩方法处理上清，获得重组蛋白，即得。
10.权利要求1所述重组鸡Cathelicidin2抗菌肽用于制备治疗革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌感染引起疾病的药物中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东省农业科学院家禽研究所（山东省无特定病原鸡研究中心），未经山东省农业科学院家禽研究所（山东省无特定病原鸡研究中心）许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201610192035.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
