[发明专利]一种鉴别NADC30-like PRRSV的PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于鉴别猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的特异性引物，其特征在于它的

上游引物序列为：5-ATGTTGTGCTTCCTGGGGTTG-3，

下游引物序列为：5-CTTGACAGGGAGCTGCTTGA-3

所述的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒包括：HP-PRRSV，Classical-PRRSV，NADC30-like PRRSV。

2.一种用于鉴别猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的特异性引物的PCR试剂盒，其特征在 于所述试剂盒主要包括权利要求1所述的特异性引物、PCRBuffer、dNTPs、rTaq酶、Marker 及阳性和阴性标准品，其特异性引物：

上游引物序列为：5-ATGTTGTGCTTCCTGGGGTTG-3，

下游引物序列为：5-CTTGACAGGGAGCTGCTTGA-3。

3.采用权利要求2所述的PCR试剂盒进行检测的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）提取待测样品的核酸；

（2）以特异性引物对检测样品进行PCR扩增反应；

（3）扩增反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳；

（4）观察电泳检测图，根据特异性目的条带判定结果。

4.权利要求2所述的PCR试剂盒检测方法，其特征在于：反应总体积为25μL，包括10× Buffer2.5μL，dNTPs2.0μL，上游引物1.0μL下游引物1.0μL，rTaq酶0.5μL，待测样品的核 酸4.0μL，超纯水补至总体积25μL；所述扩增反应的反应条件为：95℃预变性5min，94℃变 性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，30个循环，72℃延伸10min。

5.权利要求2所述的PCR试剂盒检测方法，其特征在于：步骤中所述特异性扩增产物的 大小为NADC30-likePRRSV628bp、HP-PRRSV931bp、Classical-PRRSV1021bp。

6.权利要求2所述鉴别猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的特异性引物的PCR试剂盒在检 测临床样品NADC30-likePRRSV感染方面的应用。