[发明专利]一种肺炎支原体检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种肺炎支原体的检测方法，具体涉及一种基于荧光免疫层析技术的肺炎支原体的检测方法，还涉及采用该方法的检测试剂盒。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae，MP)是一种能在无生命培养基上自行繁殖的原核生物，不易染色，没有细胞壁。有研究显示MP引起的呼吸道感染约占社区获得性肺炎的20-40％(Principi，N.，etal：Clininfectiousdiseases，2001；32：1281-1289.)。据统计，大约每年约10万成人因为MP的感染住院治疗。肺炎支原体的临床症状不明显，有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，由于MP无细胞壁，故其引起感染的治疗与其它细菌和病毒感染在治疗方法上有所不同。因此快速、准确诊断MP感染对于治疗很重要。

目前，检测MP的主要方法是MP分离培养、PCR检测、冷凝集试验、血清特异性抗体检测等几个方面，各有优缺点。病原体分离培养被认为是疾病诊断的金标准，但MP培养要求条件很高，需要的时间较长(约6周)，故对于临床患者的治疗无实用性，所以很少实验室通过培养来诊断患者是否为MP感染。目前PCR方法检测MP的P1蛋白、16SrRNA及其它蛋白基因已经有大量报道(Waveren，G.，etal：JClinmicrobiology，1999；37：14-17.)，但PCR方法操作复杂，需要有相关的仪器，实验员必须经过专门的培训，所以在一些基层单位很难推广。冷凝集试验为非特异性反应，除了在MP感染时可呈阳性外，也可见于肝病、溶血性贫血、传染性单核细胞增多症等，并且如果第一次血液标本采集的较晚，或者患者的抵抗力比较弱，检测结果也可能为阴性(Sanchez-Vargas，F.M.，etal：Clinmicrobiologyandinfection，2008；14，：105-117.)。

应用最广泛的血清学检测是ELISA，需要很少量的血清就可以进行此试验。但酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒操作繁琐，费时费力的弊端阻碍了它在即时检验中的应用。能够应用于即时检验的血清学检测方法是免疫层析方法，该方法操作简单、快速、方便、结果易于判断、无须特殊的检测设备，已在临床检验、食品安全监督与环境监控各领域得到了广泛的应用。市场上大部分免疫层析产品采用胶体金作为检测标记物，以定性和半定量为主(Kosack，C.S.，etal：Jvirologicalmethods，2014；204：6-10.)。但应用光学仪器进行半定量检测时，胶体金试纸条通常只能检测硝酸纤维素膜表面10-20μm的光学信号，损失了近80-90％的信号。

MP血清抗体的检测有IgM和IgG两种，IgM在感染7～10天后就可以被检测到(Talkington，D.F.，etal：Clinicalanddiagnosticlaboratoryimmunology，2004；11：862-867.)。由于MP感染的潜伏期为2～3周，单独检测IgG非常容易假阴性而导致漏诊误诊，而IgM一般在感染后一周出现，3～4周达到高峰，当患者出现症状就诊时，IgM抗体已达到较高水平，故IgM抗体的检测有助于MP的早期诊断。

目前，国内外采用荧光免疫层析方法检测肺炎支原体IgM抗体的研究还未见报道。选择荧光素作为标记材料来替代胶体金，建立荧光免疫层析方法将具备胶体金免疫层析简单、快速的优势，又能够具有更高的敏感性，有利于MP感染的快速、准确诊断。

发明内容