[发明专利]临床治疗级人胎盘底蜕膜来源的间充质干细胞(PDB-MSCs)无血清体外提取制备方法

权利要求书

1.一种临床治疗级人胎盘底蜕膜层来源的间充质干细胞(PDB-MSCs)制备方 法，由以下步骤组成；(1)PDB-MSCs培养液组合；(2)筛选用胎盘组织高 拟体内细胞外基质制备；(3)应用胎盘组织高拟体内细胞外基质与PDB-MSCs 培养液组合筛选培养PDB-MSCs，以及PDB-MSCs长期冻融保存液制备。

2.一种利用权利要求1所述的PDB-MSCs培养液组合包括：

配制培养液A：人胎盘脂多糖注射液0.03ml/L、EGF5～25ng/ml、干细胞 生长因子(SCF)2～11ng/ml、转铁蛋白5～15μg/ml、维生素B40.5～1mg/L、 维生素C1～4μg/ml、胰岛素5～8μg/ml、青霉素50～100u/ml、链霉素100u/m L、氢化可的松0.4μg/ml、商用培养基-低糖DMEM/F12(3:1)定容到500ml。 PH控制在7.2～7.4；

配制培养液B：人胎盘脂多糖注射液0.05ml/L、人血清白蛋白(HSA)1～ 3g/L、人血纤粘蛋白(FN)1～5μg/L、人层粘连蛋白(LN)5～10μg/L、血 小板衍生因子(PDGF)1～10mg/L、胎盘生长因子(rhPIGF)1～6mg/L、血管内皮 细胞生长因子(VEGF)1～6μg/L、EGF5～10ng/ml、维生素B1～5mg/L、叶酸1～ 10ng/ml、维生素E0.05～1mg/L、维生素B40.5～1mg/L、黄体酮0.01～ 0.04μg/L、辅酶Q100.1～2mM/L、胆固醇1～10mg/L、牛磺酸0.1～0.4g/L、 肝素钠0.1～0.3g/L、胰岛素5～6μg/ml、青霉素100u/ml、链霉素100u/mL、 商用培养基低糖DMEM与商用培养基F12(1：1)定容到500ml。PH控制在 7.2～7.4；

配制培养液C:人胎盘脂多糖注射液0.01～0.3ml/L、人血清白蛋白 (HSA)0.1～6g/L、人血纤粘蛋白(FN)3～25μg/L、人层粘连蛋白(LN)10～ 60μg/L、重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)1～4mg/L、血小板衍生因子 (PDGF)10～20mg/L、胎盘生长因子(rhPIGF)6～10mg/L、血管内皮细胞生长 因子(VEGF)6～10μg/L、重组人肝细胞生长因子(HGF)5～20mg/L、EGF、 bFGF10～25mg/L、重组人脑源性神经营养因子(BDNF)15～40ng/ml、维生素 B1～4mg/L、叶酸1～15ng/ml、黄体酮0.01～0.06μg/L、维生素E0.05～ 1.2mg/L、维生素C0.1～10mg/L、维生素B40.1～0.5mg/L、辅酶Q100.1～ 2mM/L、胆固醇1～10mg/L、牛磺酸0.1～0.4g/L、肝素钠0.1～0.3g/L、还 原性谷胱甘肽3～6μg/L、油酸0.5～7.5mg/L、转铁蛋白6～20mg/L、 胰岛素5～7mg/L、多聚赖氨酸4～6mg/L、青霉素100u/ml、链霉素100u/mL、 商用培养基低糖DMEM与商用培养基F12(1：1)定容到500ml。PH控制在7.2～ 7.4。

3.一种利用权利要求1所述筛用胎盘组织高拟体内细胞外基质制备方法，包括

其中所述的胎盘组织高拟体内细胞外基质分为三种：1.1人胎盘底蜕膜层 作为细胞外基质；1.2去羊膜胎盘组织作为细胞外基质；1.3胎盘组织作为细 胞外基质；

制备包括以下步骤：A)胎盘组织消毒处理；B)高拟体内细胞外基质脱细 胞处理；C)将消毒或经脱细胞处理的高拟体内细胞外基质进一步进行低温、 脱水、辐照灭菌处理；其中所述步骤B)的脱细胞方法选自冷酶交联剂法、 酶－非离子表面活性剂－络合剂联合法、络合剂加盐-阴离子表面活性剂法或 胰酶联合EDTA交联液法。