[发明专利]检测猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒的引物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒的引物、试剂盒及方法。所述引物如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述方法为以待检测样品的RNA为模板，进行RT‑PCR扩增反应，电泳鉴定。本发明的检测猪呼吸与繁殖障碍综合症病毒的引物具有很高的特异性和灵敏度，能够检测出猪繁殖与呼吸障碍综合症的新型病毒类NADC30病毒；PCR扩增可以通过扩增片段的大小不同快捷的对PRRSV的经典株、变异株和类NADC30毒株这3类毒株进行鉴别区分，省去测序的步骤，节省了时间和成本，操作简单、实用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，更具体地，本发明涉及一种检测猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒的引物、试剂盒及方法。

背景技术

猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(Porcine Reproductive andRespirary Syndrome Virus,PRRSV)感染引起的，以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸衰竭为主要症状的传染病，临床症状主要表现为母猪流产、早产、死胎、木乃伊胎、仔猪成活率下降和育成猪呼吸道症状等。该病于1987年在美国首次出现，随后在世界各地迅速蔓延。

猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)对养猪业造成了极大的影响，特别是北美和欧洲近年来呈现全球蔓延的趋势，主要有母猪流产、生长期猪肺炎和仔猪死亡率增加等症状，因猪耳朵呈蓝紫状，因此也被称为猪蓝耳病。在我国新出现一种高致病性蓝耳病，除了传统症状外还可见体温明显升高，达41℃以上，皮肤发红、部分猪耳朵出血、淤血呈紫红色等症状，在一个地区流行数月无明显好转，常规疗法无效。

在1990年，美国的11个州和加拿大的11个州检测到这种病毒。接着1990年在德国的明斯特地区发现报道，并且迅速的蔓延到德国的其它地区，这种病当时在德国被称为猪感染晚期流产病(SSS)和地方流行性后期流产病(ESS)。其后在欧洲的其它国家(荷兰，法国，比利时，英格兰和丹麦)相继出现。1990年晚期在北欧的猪场诊断出超过5000头患有此病的猪。尽管这种疾病没有在意大利、波兰、瑞士和澳大利亚报道过，但是在意大利和波兰的猪群中用抗体检测出PRRSV。

这种疾病对经济的影响重大，造成了20-30％的猪死胎，每窝仔猪中损失1.5-2.0只猪。在此疾病爆发时每头母猪上的损失达到250-500美元。在衣阿华州的一份报道中，100英里内的农场中有85,330只死亡，并且造成1060万美元的损失。在西班牙，当PRRS第二次流行时有近3000头猪被屠宰。2006年在中国发现高致病性PRRSV(HP-PRRSV)，影响了超过2000000头猪。这种病毒对所有年龄段的猪都有影响，症状主要是高烧(高于41℃)、高致病率(50-100％)、高死亡率(20-100％)。从2006年到2009年在中国的不同省份分离出了一大批HP-PRRSV，并且和这种疾病的爆发相吻合。

2015年，有学者报道在中国大陆出现一种新的类NADC30毒株。该类型毒株毒力较强，造成爆发母猪流产、死胎以及仔猪呼吸道疾病(死亡率可达30％-50％)(Zhou L,WangZ,Ding Y et al.NADC30-like Strain of Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome Virus,China[J].Emerg Infect Dis.2015Dec；21(12):2256-2257.)。另外有学者通过实验发现新出现的NADC30类毒株具有一定毒力，并且应用目前的防控措施较难控制(Zhao K,Ye C,Chang XB et al.Importation and Recombination Are Responsible forthe Latest Emergence of Highly Pathogenic Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus in China[J].J Virol.2015Oct 15；89(20):10712-6.)。