[发明专利]一种miRNA‑182抑制剂及其在制备防治心脏移植免疫排斥反应药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学生物工程领域，具体涉及一种miRNA-182抑制剂及其在制备防治心脏移植免疫排斥反应药物中的应用。

背景技术

心脏移植是治疗各种终末期心脏疾病的有效手段。随着新型免疫抑制剂的使用，急性排斥的发生率降低，但其仍然是造成心脏移植术后1年内受者死亡的主要因素。急性细胞排斥(acute cellular rejection，ACR)常发于术后3-6个月或偶发于术后任何时期，由T细胞介导引发淋巴细胞和巨噬细胞浸润移植物，不仅造成短期移植物损伤，且参与心脏移植物血管病变(cardiac allograft vasculopathy，CAV)。CAV造成动脉内膜层同心性增厚和血管腔弥散性变窄，是慢性排斥(Chronic rejection)的重要体现形式，其术后5年发病率达33％，严重影响移植物的长期存活。目前临床上对CAV尚无有效的治疗手段，因此早期诊断和预防CAV的发生是降低慢性排斥风险和延长心脏移植物存活时间的重要环节。

心脏移植物肥大(cardiac allograft hypertrophy)是CAV发生的重要预后指标，其病理表现为早期心肌细胞肥大和后期纤维化、胶原沉积，成为影响移植物功能的重要临床并发症。并且研究表明，早期诊断和干预心肌细胞肥大可能有益于降低CAV的发生，继而提高移植物的长期存活。

MicroRNA(miRNA)是真核生物中广泛存在的一种长约22个核苷酸的非编码小RNA分子，其通过与靶信使RNA(mRNA)的3’非翻译区(3’-UTR)结合，可在转录后水平调节靶基因的表达。miRNA对细胞发育、分化、增殖和凋亡至关重要。并且在不同种系间，miRNA在结构和功能上高度保守。在器官移植中，miRNA对T细胞和B细胞介导的排斥反应、树突状细胞功能以及调节性T细胞活性起到重要的调节作用。miRNA通过调控与移植排斥、耐受诱导或移植术后感染相关基因的表达，影响移植物的长期存活。最近，有临床研究表明，miRNA的差异表达与心脏移植、肾移植术后的移植物排斥相关。并且针对miR-122的特异性抑制药物miravirsen(SPC3649)已被用于治疗丙型肝炎。

miRNA-182位于人类7号染色体和小鼠6号染色体上，其在miRNA-183-miRNA-96-miRNA-182miRNA家族中表达量最高。研究发现，急性细胞排斥发生时miRNA-182在心脏移植物中的表达量升高8倍，在浸润淋巴细胞中的表达量升高7倍，在血浆中的表达量升高8倍。此外，在混合淋巴细胞反应(MLR)中miRNA-182的表达与T细胞的增殖呈现正相关。结合已有报道，miRNA-182受白细胞介素-2(IL-2)诱导，可促进活化的辅助型T细胞克隆扩增，提示miRNA-182在同种异体免疫反应中可能影响T细胞的功能。有研究表明，miRNA-182可间接影响低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达。由于HIF-1α的表达是心脏移植物应对缺血再灌注损伤(IRI)的重要机制，提示miRNA-182参与了影响心脏移植物的功能。

转录因子Forkhead box protein O1(FOXO1)调控细胞的增殖、凋亡、代谢、DNA修复和血管生成，并且对T细胞、B细胞等免疫细胞介导的免疫稳态起关键调节作用。研究发现通过双荧光酶素报告系统确认Foxo1是miRNA-182的靶基因，并且随着心脏移植物中miRNA-182的表达量升高，FOXO1的蛋白水平在心肌细胞和浸润CD3+T细胞中相应降低，提示miRNA-182通过调控FOXO1，在不同细胞类型中可能发挥不同的生物学功能。虽然研究发现在肿瘤细胞中Foxo1也受miRNA-9，miRNA-27和miRNA-153的调控，但miRNA表达图谱显示心脏移植术后只有miRNA-182呈显著性差异表达，提示miRNA-182表达升高是器官移植术后FOXO1蛋白水平下调的关键调控因子。FOXO1在淋巴细胞中表达下调，可导致浸润淋巴细胞数量增多；FOXO1在心肌细胞中表达可降低钙调磷酸酶(calcineurinphosphatase)活性，其表达下调可导致心肌细胞肥大，提示miRNA-182是急性细胞排斥与心脏移植物肥大的重要关联因素。因此，研究并靶向干预miRNA-182对于降低同种异体免疫反应和延长移植物的存活有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种miRNA-182抑制剂，该抑制剂可用于制备防治心脏移植免疫排斥反应药物中。