[发明专利]一种能高效扩增人淋巴细胞的无动物源性培养基

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种能高效扩增人淋巴细胞的无动物源性培养基。

背景技术

有效的细胞免疫治疗离不开在体外大量培养、扩增和活化淋巴细胞。这其中使用量最大 的试剂就是培养基。培养基为淋巴细胞的生长提供了基本的环境，包括为淋巴细胞存活提供 适宜的渗透压，PH值，为淋巴细胞的生长提供了一切所需的营养因子，包括无机盐、氨基酸、 功能性的蛋白、维生素等，也是淋巴细胞各种代谢产物的排放场所。传统的培养基为了提供 这些营养因子，大多采用动物或人的血清及其组分作为添加物，比较常见的有新生牛血清、 胎牛血清、人AB血清、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、人转铁蛋白等。使用动物血清的优 点是有足够的量供应，价格便宜，但是使用动物血清的缺点是有潜在传播传染病的风险，以 及由于异种蛋白导致过敏症的发生，而且动物血清并不能很好的支持人淋巴细胞的生长。而 使用人AB血清的好处是可以很好的支持人淋巴细胞的生长，但是人AB血清来源困难，供 应量有限，而且也存在传播传染病的风险。

现有商品化无血清淋巴细胞培养基大都添加有人血白蛋白、人转铁蛋白等人源性组分。 由于这些组分来源于人的血清，虽然有各种病原体的检测技术和消毒技术，但仍然避免不了 传播疾病的风险；由于来源于不同的供者，造成批次间差异，不利于质量的控制。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种能高效扩增人淋巴细胞的无动物源性 培养基，该培养基不采用动物或人的血清及其组分作为添加物，降低了传播疾病的风险，同 时可以保证不同批次质量的均一性。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种能高效扩增人淋巴细胞的无动物源性培养基，包括基础培养基，还包括血清替代物 和扩增促进剂；

所述血清替代物包括重组人血白蛋白、重组人转铁蛋白和重组人胰岛素，还包括脂质、 微量元素化合物和维生素；所述脂质包括胆固醇、亚油酸、亚麻酸，所述微量元素化合物包 括硝酸铁、亚硒酸钠、硫酸铜和硫酸锌；

所述扩增促进剂为化合物CephaloziellinN。

进一步地，所述重组人血白蛋白的浓度为5mg/L～20mg/L。

进一步地，所述重组人转铁蛋白的浓度为40mg/L～80mg/L。

进一步地，所述重组人胰岛素的浓度为10mg/L～40mg/L。

进一步地，胆固醇浓度为0.5mg/L～2.5mg/L，亚油酸浓度为0.2mg/L～0.4mg/L，亚麻酸浓 度为0.3mg/L～0.5mg/L。

进一步地，微量元素化合物中的硝酸铁浓度为0.2mg/L～0.4mg/L，亚硒酸钠浓度为 0.1mg/L～0.2mg/L，硫酸铜浓度为0.1mg/L～0.2mg/L，硫酸锌浓度为0.3mg/L～0.7mg/L。

进一步地，所述维生素包括维生素E，维生素E浓度为4mg/L～8mg/L。

进一步地，化合物CephaloziellinN的浓度为5mg/L～15mg/L。

进一步地，所述基础培养基为RPMI1640培养基。

进一步地，所述基础培养基中添加1～3％体积百分含量的自体血清。

本发明的优点：

本发明提供的无动物源性培养基能高效扩增人淋巴细胞，且杀瘤活性强。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽 管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明 的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

本发明化合物CephaloziellinN的制备方法参见文献：SecondaryMetabolitesfromthe ChineseLiverwortCephaloziellakiaeri,J.Nat.Prod.2013,76,1700-1708。

实施例1：无动物源性培养基组成