[发明专利]一种泡囊草的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及一种泡囊草的组织培养方法。

背景技术

泡囊草系茄科植物泡囊草(Physochlaina Physaloides(L.)G.Don)的干燥根，作为蒙药“混-浩日素”始载于藏、蒙医药经典著作《无误蒙药鉴》中,《认药白晶鉴》等文献均有记载，为中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)收载的品种[云彩麟,宋宏春,张宏宇,刘东明.泡囊草不同炮制方法对急性毒性和药效的影响[J].中国民族医药杂志.2008.3:57～58]。已有泡囊草中莨菪碱含量测定的相关文献[张润祥.HPLC法测定蒙药材泡囊草(混-好日苏)中莨菪碱的含量中国药品标准[J].2011.12(6):419～421]，其主要成分为山莨菪碱、莨菪碱、东莨菪碱、新芦丁及红古豆碱等[Reinouts van Haga,R:cuscohygrine,a normal constituent alkaloid of Atropa belladonna[J].Nature.1954.174:833]，蒙医药理论研究表明“混-浩日素”具有杀“黏”、消肿、杀虫、镇痛、解痉、壮阳等功效，用于“黏”性胃炎、结喉、发症、虫疾、脑刺痛、头痛,阳痿等的治疗[国家中医药管理局.中华本草蒙药卷[M].上海科技出版社.2004.233]。泡囊草主产于内蒙古自治区锡林郭勒阿巴嘎旗、呼伦贝尔鄂温克旗和乌兰察布市，我国的新疆、黑龙江、河北等省区也有分布，生于山坡、山沟及草地。由于资源少、分布地区局限，因此进行组织培养试验，为蒙药的现代化发展，大面积栽培生产和开发利用泡囊草及同属其它种植物资源提供依据和参考。

组织培养中可用做外植体进行培养的材料很多，例如带腋芽茎段、根、茎尖等，花丝、花梗、花托、花柱、子房等花器官也可用于外植体培养[张彦妮.影响植物组织培养成功的因素[J].北方园艺,2003(3):132～133；姚连芳,周俊国等.百合的组织培养试验研究[J].贵州农业科学.1999.27(3):47～48；唐东芹等.百合基因转化胚性愈伤组织受体系统的建立[J].浙江林学院学报.200320(3):273～276；白美发.青山百合的组织培养与快速繁殖[J].贵州农业科学.2003.31(6):25～26；李睿.麝香百合的组织培养与快速繁殖[J].甘肃林业科技.2003.28(2):13～14],在实际生产中需要根据芽的增殖途径和试验目的来选择合适的外植体。

不同的植物组织对营养成分的要求不同，禾谷类的花药培养，可以选择高磷的N₆培养基，而草莓的花药培养以低盐的White培养基比较适宜，马鞭草科乔木和柚木必须在高盐的MS培养基中才能成苗，杜鹃花的茎尖培养常用1/4MS或采用6,7-V培养基[涂艺声.经济植物大规模快速繁殖技术[M].化学工业出版社.2009.35]。目前还没有对泡囊草进行组织培养获得成功的报道，在实际生产中需要筛选适宜的泡囊草培养基。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种泡囊草的组织培养方法，该方法用于泡囊草的组织培养，具有繁殖速度快、诱导率高和移栽成活率高的优点。

基于上述目的，本发明提供的一种泡囊草的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)外植体灭菌

选取泡囊草当年生、健壮枝条上的叶片为外植体，用解剖刀将外植体切成5×5mm的方块，用中性洗涤剂洗涤外植体方块10min洗掉表面污渍后，自来水下冲洗20min，滤纸吸干水分后置于超净工作台灭菌，用质量分数为0.1％升汞进行消毒处理2～3min，无菌水冲洗3～5次；

(2)泡囊草芽的初代诱导培养

将灭菌好的外植体方块接种到初代诱导培养基上，初代诱导培养7～15天，至新芽长出；

(3)继代增殖培养

将获得的新芽接种到继代增殖培养基上，继代增殖培养20～26天，至不定芽伸长至2～3cm；

(4)组培苗生根

将不定芽自基部切下，接种到生根培养基上，培养18～21天，至幼根伸长至2～3cm；

(5)组培苗移栽

将幼根伸长至2～3cm的组培苗在室温下炼苗2～3天后，除去培养瓶的封口膜，在培养瓶内添加8mL水续炼苗3～5天，然后取出组培苗，洗去根上附着的多余培养基，用稀释10倍的多菌灵溶液浸泡8～10min，移栽到含水量为68％～71％的无菌营养土中，外覆塑料薄膜保湿，14～15天后移栽到大田，即可。