[发明专利]一种制备重组人凝血因子Ⅷ的方法有效
| 申请号： | 201610200676.4 | 申请日： | 2016-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN107287265B | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 赵伟;吕海丽;蒋丹;张哲文;秦宇;徐霆;郭康平;张喜全;程艳菊 | 申请（专利权）人： | 正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司;正大天晴药业集团股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 211122 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 重组 凝血 因子 方法 | ||
1.一种制备重组人凝血因子Ⅷ的方法，包括：
(1)采用波浪式生物反应器培养表达重组人凝血因子Ⅷ的细胞，所述细胞处于对数生长期且细胞状态良好，所述反应器培养的温度为37℃，转速15～25rpm，角度5～8度，CO2浓度6～10％，空气0.3～0.5lpm，培养时间为72～110小时，培养方式为流加培养；
(2)从步骤(1)的细胞培养液中收获重组人凝血因子Ⅷ。
2.权利要求1的制备方法，其中所述重组人凝血因子Ⅷ选自全长的重组人凝血因子Ⅷ，或者B结构域缺失的重组人凝血因子Ⅷ。
3.权利要求1的制备方法，其中步骤(1)中波浪式生物反应器的转速为16-24rpm。
4.权利要求3的制备方法，其中步骤(1)中波浪式生物反应器的转速为16、17、18、19、20、21、22、23或24rpm。
5.权利要求1的制备方法，其中步骤(1)中波浪式生物反应器的角度为6-7度。
6.权利要求1的制备方法，其中步骤(1)中CO2浓度为7-9％。
7.权利要求1的制备方法，其中步骤(1)中空气设置为0.4lpm。
8.权利要求1的制备方法，其中步骤(1)中培养时间为80-100小时。
9.权利要求8的制备方法，其中步骤(1)中培养时间为88-96小时。
10.权利要求1的制备方法，其中步骤(1)中流加培养是在培养周期的24～72小时内补加200mmol/L谷氨酰胺至其浓度为2～4mmol/L，补加200g/L葡萄糖溶液至葡萄糖含量为2～4g/L。
11.权利要求1的制备方法，其中步骤(1)的波浪式生物反应器选自WAVE生物反应器、AppliFlex、BIOSTAT RM、Celltainer、ReadyToProcess WAVE25、Xuri细胞扩增系统W25、XRS20、SB50-X或SB200-X。
12.权利要求1的制备方法，其中步骤(2)收获重组人凝血因子Ⅷ是在含有Na+的溶液中进行的。
13.权利要求1的制备方法，进一步包括将步骤(2)收获的重组人凝血因子Ⅷ纯化的步骤，其中所述纯化步骤包括：S/D病毒灭活、亲和层析、阴离子交换层析、疏水层析、纳滤和超滤置换缓冲液。
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