[发明专利]一种产碱杆菌荧光定量的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于产碱杆菌荧光定量的试剂盒，其特征在于，包括用于产碱杆菌定量检测的 特异性引物序列SEQIDNo.1和SEQIDNo.2，以及特异性探针序列SEQIDNo.3。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性标准品，所述阳 性标准品中包含有插入了产碱杆菌特异性DNA序列SEQIDNo.4的重组质粒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述重组质粒的浓度为1.0×10³～1.0× 10⁷。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，用于所述特异性DNA序列SEQID No.4扩增的引物序列为SEQIDNo.5和SEQIDNo.6。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性标准 品，所述阴性标准品包含有不含产碱杆菌特异性DNA序列的质粒。

6.根据权利要求2-5任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的质粒或重组质粒相同， 选自pETs、pUCs、pGM-T、pBR322、pMD-T中的一种，优选为pGM-T、pBR322。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括缓冲 液、DNA聚合酶和dNTPs。

8.根据权利要求7所述的荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液包括三羟甲基氨 基甲烷、氯化钾和氯化镁。

9.根据权利要求8所述的荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述的三羟甲基氨基甲烷的浓 度为50～200mM，优选为100～150mM；氯化钾的浓度为300～800mM，优选为400～600mM；氯化 镁的浓度为10～30mM，优选为10～20mM。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述特异性探针为带有荧 光基团和淬灭基团的特异性序列，其中，所述的荧光基团选自FAM、HEX、TET、VIC中的一种， 优选为FAM、VIC；所述的淬灭基团选自MGB、TAMRA、BHQ中的一种，优选为MGB。

11.特异性引物序列SEQIDNo.1和SEQIDNo.2，以及特异性探针序列SEQIDNo.3在 制备产碱杆菌含量测定和/或检测用试剂中的应用。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述的产碱杆菌含量测定和/或检测用 试剂的使用方法如下：

分别在阳性标准品组、阴性标准品组以及样品DNA组中加入用于产碱杆菌定量检测的 特异性引物序列SEQIDNo.1、SEQIDNo.2和特异性探针序列SEQIDNo.3以及DNA聚合 酶，混合均匀后进行荧光定量PCR反应。

13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述的荧光定量PCR反应条件为：94～95 ℃预变性2～5min，1个循环；94～95℃15～20s、55～60℃30～50s，40～50个循环。