[发明专利]一种干细胞培养试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于干细胞培养领域，具体涉及一种干细胞培养试剂盒。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育 早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进 干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或 体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、 内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子 细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。

间充质干细胞包括脐带间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。

脐带间充质干细胞是一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的干细胞，具有来源广泛、 易于采集、保存和运输、无异体排斥、避免伦理争议等诸多优点。流式细胞仪分析发现脐带 间充质干细胞高表达间质细胞标志(CD44、CD105)、整合素受体(CD29、CD49b、CD49c、 CD51)、不表达造血系标志(CD34、CD45)白细胞抗原HLA-DR和内皮细胞标志CD31。 脐带间充质干细胞在体内外可以分化为骨细胞、软骨细胞、肝细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞 以及神经元细胞等。目前人脐带间充质干细胞在组织工程骨、人工血管以及基因治疗等临床 应用研究中已逐渐深入，并已显示出广阔的应用前景。目前，对脐带间充质干细胞的分离培 养、扩增还没有统一的标准，存在纯度低、原代培养时间长等缺点。各种类型的成纤维成体 干细胞扩增一般在2～3天开始进入指数式生长，相差不大，而原代细胞由于组织来源不同， 出现细胞克隆时间差异较大，所以，原代细胞传代时间是分离得到目的细胞的关键。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种能够提高间充质干细胞原代细胞传代 时间的干细胞培养试剂盒，以使间充质干细胞多次传代后依然保持有细胞全能性。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种干细胞培养试剂盒，包括细胞培养液A和细胞培养液B；

所述细胞培养液A为含80～120ng/ml细胞因子LIF、80～120ng/ml细胞因子bFGF和 20～30μg/mlPedinophyllolJ的Knockout-DMEM培养基；

所述细胞培养液B为胎牛血清。

进一步地，所述细胞培养液A为含100ng/ml细胞因子LIF、100ng/ml细胞因子bFGF和 25μg/mlPedinophyllolJ的Knockout-DMEM培养基。

进一步地，所述干细胞为脐带间充质干细胞。

进一步地，所述干细胞为骨髓间充质干细胞。

进一步地，所述细胞培养液A和细胞培养液B均为无菌，并各自独立包装。

进一步地，所述的干细胞培养试剂盒还包括细胞洗涤液和细胞消化液；所述细胞洗涤液 为生理盐水；所述细胞消化液为CollagenaseII水溶液。

进一步地，所述细胞消化液为浓度为0.2g/100ml的CollagenaseII水溶液。

进一步地，所述生理盐水由氯化钠和水组成，氯化钠的浓度为0.9g/100ml。

进一步地，所述细胞培养液A、细胞培养液B、细胞洗涤液和细胞消化液均为无菌，并 各自独立包装。

上述干细胞培养试剂盒在间充质干细胞培养中的应用。

本发明的优点：

本发明提供的培养试剂盒能够提高间充质干细胞原代细胞传代时间，使间充质干细胞多 次传代后依然保持有细胞全能性。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽 管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明 的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

本发明化合物PedinophyllolJ的制备方法参见文献：HighlyOxygenatedent-Pimarane-Type DiterpenoidsfromtheChineseLiverwortPedinophylluminterruptumandTheirAllelopathic Activities,J.Nat.Prod.2013,76,1647-1653。