[发明专利]一种基于微球的杯式时间分辨荧光降钙素原分析试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于临床医学诊断领域，特别涉及一种基于微球的杯式时间分辨荧光降钙素原分析试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

降钙素原(PCT)是一种用于严重细菌感染诊断与治疗监测的非创伤性临床实验室指标，自1993年国外首次报道血清降钙素原(PCT)水平与细菌感染有关以来，各类研究表明，PCT正在越来越多地被认为是细菌感染和脓毒血症的良好标记物，从而成为临床诊断中的一个重要工具。PCT浓度的增长反映了从一个健康状态到细菌感染的最严重后果(脓毒血症、严重脓毒症、脓毒性休克)的持续发展，呈现正相关性。因此，对于细菌感染和脓毒血症，高灵敏度、全定量PCT检测不仅可以进行早期的临床诊断，而且能够指明疾病的进程、预后以及对治疗方法进行指导，而目前研究的更长远的应用是将PCT作为抗生素管理的有效工具。

与其他细菌感染的传统诊断指标如白细胞计数、血沉、C-反应蛋白、细菌培养等比较，PCT拥有早期、快速、更高的灵敏度和特异性，从临床应用鉴别诊断中可知，PCT在细菌感染特别是脓毒症方面的诊断的特异性明显优于传统诊断指标，目前在国外已广泛应用于临床各科室。具体应用如下：

1、细菌感染早期的鉴别诊断。通常在发生细菌感染后2-6小时快速升高，并可检测到；对细菌感染的诊断特异性在90％左右，而在病毒感染、自身免疫性疾病、慢性非特异性炎症等情况下几乎不升高。

2、与感染病情的严重程度与发展呈正相关。随着感染严重程度的增加，PCT浓度明显增高，尤其对严重脓毒症和脓毒性休克的诊断特异性明显高于WBC、CRP等指标，国外某些文献指出其特异性甚至可达到100％，因此PCT浓度测定是MODS(多器官功能障碍)发生的预警指标。

3、细菌感染治疗效果及预后观察。PCT水平的下降表明炎性反应的降低及感染灶的清除，因此可提示良好的预后及治疗效果观察，与疾病的发展呈现正相关。

4、在一定程度上可减少临床抗生素的滥用。采用PCT浓度监测与细菌血培养、鉴定药敏等相结合，可以协助临床正确、合理的使用抗生素；国外有研究表明，将PCT定量检测用于门诊怀疑细菌感染的患者，可快速的明确诊断，合理的使用抗生素，防止抗生素的滥用。

因此，降钙素原全定量检测对临床重症监护室、急诊科、呼吸科、新生儿室等科室有着重要的临床意义；不仅如此，也可作为其他科室如普通内科门诊、手术室、血液科、肿瘤科、器官移植中心等科室常见的手术后、放化疗、器官移植后的常规感染性监测指标；同时可协助微生物室的鉴定培养系统对医院院内感染进行更有效的监测及判定。因此，对临床上出现的感染性疾病，尤其是重症感染的诊断与监测所产生的临床效用是不可估量的。

高灵敏度、全定量PCT检测不仅可以完善检验科微生物实验室对细菌感染、脓毒血症早期的快速诊断与治疗监测系统，同时也完善临床急诊、危重症实验室检测项目系统。

传统上多用化学发光法、电化学发光法及胶体金免疫层析法或者荧光免疫层析法等测定PCT。但放射免疫法和酶联免疫吸附法操作复杂，检测耗时长，目前几乎已被淘汰；化学发光法对技术要求高，操作步骤相对比较繁琐，需要多步试剂添加过程；电化学发光法对技术要求高，不易在临床实验室中进行常规开展。胶体金免疫层析法虽然具有标本用量少，简便快速，便宜的优势，然而当遇到某些样品中抗原或抗体含量极低时，胶体金的颜色将很浅甚至无显色，很难用肉眼来判断结果，容易出现误判，灵敏度较低。荧光免疫层析法虽然灵敏度比胶体金免疫层析法要高，但是其检测精密度并不理想，灵敏度与大型化学发光或者电化学发光仪器仍有差距。

时间分辨荧光(Time-resolvedFluorescence，TRF)是一种非同位素荧光标记物，与普通荧光相比，具有stock位移大，荧光寿命长等特点，可以有效的避免样品中的本底荧光，以及激发光等杂散光的影响，因此相比普通荧光具有更高的灵敏度和抗干扰能力。

目前市面上采用时间分辨荧光检测的试剂均采用解离增强镧系元素荧光免疫分析(DELFIA)，它采用具有双功能基团结构的螯合物，使其一段与铕(Eu)连接，另一端与抗体/抗原分子上的自由氨基连接，形成EU标记的抗体/抗原，经过免疫反应后形成免疫复合物，由于这种复合物在水中的荧光强度非常弱，需要加入一种解离增强剂，使得铕离子从复合物上解离下来，并与增强剂中的另一种螯合剂形成胶态分子团，这种分子团在紫外光的激发下能发出很强的荧光。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于微球的杯式时间分辨荧光降钙素原分析试剂盒，该试剂盒能在较短的检测时间内完成降钙素原的检测，检测时间短，检测灵敏度高。