[发明专利]一种丙型肝炎病毒NS3抗原检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体是一种丙型肝炎病毒NS₃抗原检测 试剂盒。

背景技术

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus,HCV)感染而引起的严 重威胁人类健康的传染性疾病。全球约有1.3-1.7亿HCV感染者,大约20％ 可以自然清除，80％发展为HCV慢性感染。10-20％的HCV慢性感染会进一步 发展为慢性进行性肝病，包括肝硬化、肝细胞癌等。HCV是一种非甲非乙型 肝炎病毒，后命名为丙型肝炎病毒，归属于肝炎病毒属(Hepacivirus)，黄 病毒科(Flaviviridae)。HCV病毒体呈球形，为单股正链RNA病毒。HCV-RNA 全长约为9.6kb，包括一个位于基因中央的开放阅读框(ORF)。该阅读框编码 3000多氨基酸的前体多聚蛋白，其通过宿主和病毒的蛋白酶作用被切割成 10个具有独立功能的HCV蛋白,根据功能的不同分别命名为核心蛋白Core (C)，包膜蛋白(envelopeprotein)1、2(E1、E2)，p7和非结构蛋白(non structuralprotein)NS₂、NS₃、NS_4A、NS_4B、NS_5A和NS_5B。NS₃蛋白是HCV病毒 复制中重要的功能蛋白之一，发挥丝氨酸蛋白酶,解旋酶和NTP酶活性，成 为当今HCV诊断，治疗和预防的研究热点。

由于多数丙肝患者不出现明显的临床症状，大部分病人直到出现肝硬化 甚至肝癌时，才发现自己患有丙肝。因此早期诊断、早期治疗非常重要。

目前我国阻断丙型肝炎传播的主要方法是：1、酶联免疫吸附法(ELISA) 检测丙型肝炎抗体(抗-HCV)筛选供血员，然而抗-HCV的出现是在HCV感染后 的6-12周(窗口期)，所以抗-HCV阴性并不能排除携带HCV具有传染性的可 能，存在漏检的可能性。2、HCV-RNA检测存在以下问题：价格昂贵，国产为 200元，进口为400元。3、由于RNA易降解，易出现假阴性，因此对样本要 求高；易出现假阴性、假阳性结果，对检测人员的要求高。

目前国内已有的丙肝抗原检测只针对核心抗原(HCV-CAg)，HCV核心抗原 的检测也可缩短HCV诊断的“窗口期”，然而核心抗原是HCV结构区的一部 分，检出率低，若能对非结构区抗原进行联合检测，可能将提高检出率。

血清中可存在游离的非结构蛋白NS₃，其保守性相对较高，可用于血清 学诊断。本公司产品丙型肝炎病毒NS₃抗原检测试剂盒(酶联免疫法)，针 对丙肝非结构蛋白NS₃，联合上述检测方法可以避免丙型肝炎筛查漏诊的发 生，缩短窗口期，具有早期诊断丙型肝炎的临床价值。

HCAg是HCV复制的直接指标，在血液中含量少，为了研究HCV在宿主体内 有无复制，对他人有无传染性，以及解决HCV感染的早期诊断，需要用特异 性强、敏感度高的抗-HCVMcAb建立敏感、特异和快速的血液中HCAg直接检 测试剂。由于丙型肝炎病毒的高度变异性，人们在设计测定丙肝抗原的试剂 盒时，自然地把注意力集中在病毒基因序列相对保守的结构蛋白核心抗原。 因此，目前商品化的试剂盒都是针对核心抗原，忽略了非结构蛋白NS₃抗原作 为抗原靶点的可行性。国际上美国强生公司已推出了用双抗体夹心法定性或 定量检测血清样品中总的或游离的HCV核心抗原ELISA试剂，雅培公司采用化 学发光法定量检测血清或血浆样品的HCV核心抗原ELISA试剂。但其试剂价格 昂贵，不适合在国内普及应用。最近，国外有报道：NS₃抗原区域具有相对保 守的抗原决定簇和较高的抗原性，是目前HCV抗体诊断试剂盒的关键抗原。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提供一种丙型肝炎病毒NS₃抗原检测试剂盒。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：一种丙型肝炎病毒 NS₃抗原检测试剂盒，包括如下主要成分：抗HCV-NS₃单克隆抗体包被板、 HCV-NS₃校准品、样品稀释液、浓缩的抗体酶结合物、浓缩的抗体酶结合物 稀释液、浓缩洗涤液、单组份TMB显色液、终止液、封板膜。