[发明专利]检测中华鳖细小病毒的特异性引物、探针及快速检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测中华鳖细小病毒的特异性引物、探针及快速检测试剂盒，其中，中华鳖细小病毒链置换等温扩增可视化快速检测试剂盒包含引物组A，中华鳖细小病毒荧光定量检测试剂盒包括特异性引物组B和Taqman荧光探针C；本发明采用链置换酶、等温扩增和荧光定量技术，通过检测中华鳖细小病毒的衣壳蛋白基因，来检测中华鳖细小病毒，这是目前国内外首次研制检测中华鳖细小病毒的引物组和试剂盒。该试剂盒的研制为中华鳖细小病毒病的监测和预防奠定基础。

技术领域

本发明属于靶DNA片断的快速检测领域，具体地说，涉及一种检测中华鳖细小病毒的特异性引物、探针及快速检测试剂盒。

背景技术

中华鳖细小病毒(Trionyx sinensis Dependoparvovirus，TSDPV)是引起中华鳖大量死亡的致病性病毒，常引起中华鳖肝炎、肠道卡他性炎症和胰脏点状坏死，对中华鳖养殖产业危害极大。TSDPV为单链DNA病毒，属于细小病毒目细小病毒科细小病毒亚科依赖性细小病毒属，该病毒是目前发现能够感染中华鳖的第二个DNA病毒。该病毒于2012年从患肝炎和肠炎的中华鳖中分离获得，其造成中华鳖在养殖期大量死亡，死亡率一般为60～70％，严重的达到85％以上，近几年造成的经济损失无法估量。该病毒在国内外未见报道，由于该病毒至今未有检测试剂盒和检测方法，严重阻碍了该病毒引起疾病的预防工作，因此该病毒检测试剂盒的开发和检测技术的研究显得尤为重要。

发明内容

有鉴于此，本发明针对上述问题，提供了一种检测中华鳖细小病毒的特异性引物、探针及快速检测试剂盒，本发明的引物、探针和试剂盒特异性强，敏感性高，能实现快速、有效且准确检测中华鳖细小病毒；本发明中的两种试剂盒分别为链置换等温扩增可视化快速检测试剂盒和荧光定量检测试剂盒，两种试剂盒都是在封闭的情况下判断结果，扩增产物不会对检测环境造成污染，可用于中华鳖细小病毒病的监测和早期预防。本发明采用链置换酶、等温扩增和荧光定量技术，通过检测中华鳖细小病毒的衣壳蛋白基因，来检测中华鳖细小病毒，这是目前国内外首次研制检测中华鳖细小病毒的试剂盒；该试剂盒的研制为中华鳖细小病毒病的监测和预防奠定基础。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种检测中华鳖细小病毒的特异性引物组A，该引物组A包含引物TSDPV-F3、引物TSDPV-B3、引物TSDPV-FIP和引物TSDPV-BIP，

引物TSDPV-F3的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

引物TSDPV-B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

引物TSDPV-FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

引物TSDPV-BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

本发明还公开了一种检测中华鳖细小病毒的引物探针混合物，其由引物组B和Taqman荧光探针C组成，探针C的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

进一步地，引物组B包含引物TSDPV-q165F和引物TSDPV-q165R；

引物TSDPV-q165F的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；

引物TSDPV-q165R的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；

探针的C的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

进一步地，荧光报告基团选自6-羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、VIC荧光染料、四氯-6-羧基荧光素、羧基-X-罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、磺酰罗丹明、6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁3.5、花菁5和花菁5.5中的一种或几种；所述荧光淬灭基团选自6-羧基四甲基罗丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬灭剂1、黑洞淬灭剂2或黑洞淬灭剂3中的一种或几种。