[发明专利]一种草酸脱羧酶及草酸脱羧酶的重组表达方法

权利要求书

1.一种草酸脱羧酶，其特征在于：为通过大肠杆菌表达系统进行重组表达， 并在pH＜3.0时稳定且有活力；表达过程中该草酸脱羧酶的蛋白序列较原生酶 蛋白序列缺失信号肽片段。

2.一种可食用组合物，其特征在于，含有权利要求1所述的草酸脱羧酶， 用于预防和/或治疗原发性高草酸尿症、II型高草酸尿症、肠源性高草酸尿症及 含草酸钙泌尿结石疾病中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的可食用组合物，其特征在于，为药物组合物、保 健食品或特殊医学用途配方食品。

4.一种食品添加剂，其特征在于，含有权利要求1所述的草酸脱羧酶，用 于制备低草酸/无草酸的食品或饮料。

5.一种草酸脱羧酶的重组表达方法，适用于pH＜3.0时仍有活力的草酸脱 羧酶的表达生产，其特征在于，将优化后草酸脱羧酶编码基因的DNA片段与 大肠杆菌表达载体按照3～9:1的摩尔比混合进行连接，构建重组表达载体，重 组表达载体转化DH5a感受态细胞；通过PCR及测序验证来筛选构建成功的重 组表达载体转化菌，培养后抽取重组表达载体，转化含有分子伴侣的大肠杆菌 表达菌株，进行15～30℃的低温培养并诱导蛋白表达。

6.根据权利要求5所述的草酸脱羧酶的重组表达方法，其特征在于，所述 的优化包括删除草酸脱羧酶编码基因DNA片段的信号肽片段；或删除草酸脱 羧酶编码基因DNA片段的信号肽片段并在C端融合助溶标签；或删除草酸脱 羧酶编码基因DNA片段的信号肽片段并在C端融合助溶标签以及进行密码子 优化；或对草酸脱羧酶编码基因DNA片段进行密码子优化和删除信号肽片段。

7.根据权利要求6所述的草酸脱羧酶的重组表达方法，其特征在于，所述 助溶标签为多聚谷氨酸片段，多聚天冬氨酸片段，多聚赖氨酸片段，多聚谷氨 酰胺片段和多聚天冬酰胺片段中的任意一种，或者由谷氨酸、天冬氨酸、天冬 酰胺、赖氨酸和谷氨酰胺五种氨基酸随机组合的片段。

8.根据权利要求5所述的草酸脱羧酶的重组表达方法，其特征在于，所述 表达载体为乳糖诱导表达载体、半乳糖诱导表达载体、IPTG诱导表达载体、热 诱导表达载体或者冷诱导表达载体。

9.根据权利要求5所述的草酸脱羧酶的重组表达方法，其特征在于，所述 大肠杆菌表达菌株为BL21、BL21(DE3)、K12、K12(DE3)、Origami、 Origami(DE3)、OrigamiB、OrigamiB(DE3)、Rosetta或Rosetta(DE3)。

10.根据权利要求5所述的草酸脱羧酶的重组表达方法，其特征在于，所 述的分子伴侣为pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pGTf2和pTf16中的任意一种或者 几种。

11.根据权利要求1所述的草酸脱羧酶，其特征在于，氨基酸序列如SEQ IDNO:1～11任一所示。