[发明专利]Y型含细胞的神经导管制备方法

权利要求书

1.Y型含细胞的神经导管制备方法，神经导管由可降解的高分子聚合物和细胞组成，利用生物3D打印挤出成形、细胞电纺丝和近场直写复合工艺制备，包括以下步骤：

1)称取15克明胶材料，在搅拌情况下缓缓加入到80克的去离子水中，至充分溶胀后升温至80-100℃加速溶解，并保温3小时制得均匀的高分子溶液，再经100℃高温蒸汽消毒，将消毒后的材料装入喷头二中备用；

2)称取1.5克聚乙烯醇(PVA)材料，在搅拌情况下缓缓加入到15克的去离子水中，至充分溶胀后升温至80-100℃加速溶解，并保温3小时制得均匀的高分子溶液，再经100℃高温蒸汽消毒；

3)第4代人的细胞用0.25％的胰蛋白酶消化后收集在50mL离心管，1000r/min离心5min，弃上清液，将细胞悬液移至消毒后的PVA溶液搅拌均匀得到含细胞的PVA溶液，将其装入喷头三中备用；

4)称取10克聚对二氧环己酮(PPDO)颗粒置于喷头一加热装置中，将加热装置的温控器温度设为110℃对PPDO进行加热，当温度达到设定值时保温2分钟，喷头一与接收平台的距离为1.5mm，将材料以370μ L /min由微量泵提供的稳定流量，进行连续挤出，同时接收平台按照所构建的Y型神经导管模型沿X/Y方向进行规律运动，PPDO迅速固化成型，完成内层神经导管制备；

5)将固化成形后的内层神经导管安装在旋转装置上，运动到喷头二工位，喷头与内层神经导管的外表面距离为0.5mm，将材料以400μ L /min由微量泵提供的稳定流量，进行连续挤出，旋转装置一边旋转一边移动，明胶材料包裹住PPDO并固化成形，完成中间层和内层神经导管制备；

6)旋转装置运动到喷头三工位，喷头三上加载8k V的直流电压，喷头和神经导管之间的距离为5mm，负极加载在接收平台上，将材料以180μ L /min由微量泵提供的稳定流量，进行连续挤出，旋转装置一边旋转一边移动，纺丝3个小时，在中间层神经导管上沉积一层含细胞的纳米纤维膜，完成神经导管的整个制备。

2.根据权利要求1所述的Y型含细胞的神经导管的制备方法，其特征在于：所述步骤3)的细胞为神经干细胞或神经元细胞。