[发明专利]一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针，其特征在于，所述的比率型荧光探针的结构式为如(1)所示：

2.一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于，所述的比率型荧光探针的制备方法包括以下步骤：

步骤1，合成2，3，3-三甲基-3H-吲哚-5-羧酸

a.将4-羧基苯肼盐酸盐和氢氧化钠混合溶于无水乙醇，室温下，超声震荡搅拌至溶解；

b.将步骤a中的溶解液旋干，除去无水乙醇，再将剩余的固体溶于冰乙酸中，加入醋酸钠，超声震荡搅拌至溶解；

c.向步骤b中的溶解液中加入3-甲基-2-丁酮，加热至100℃，回流12h；

d.待步骤c中的反应液冷却至室温，减压蒸馏，除去冰乙酸；将蒸馏后剩余的溶液冷却至0℃，加入饱和碳酸钠溶液使之溶解，滴加盐酸调节pH＝4，用二氯甲烷萃取，收集油相；将油相用无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干二氯甲烷，得红色油状物，为2，3，3-三甲基-3H-吲哚-5-羧酸。

步骤2，合成5-羧基-1，2，3，3-四甲基-3H-碘化吲哚盐

①将步骤1中合成的2，3，3-三甲基-3H-吲哚-5-羧酸溶于乙腈，加入碘甲烷，加热至45℃，反应12h；

②待步骤①中反应液冷却至室温，加入乙醚，直至无沉淀产生止，抽滤，乙醚洗，真空干燥，得米色固体5-羧基-1，2，3，3-四甲基-3H-碘化吲哚盐，其结构如(2)所示：

步骤3，合成比率型荧光探针

I.将步骤2中合成的5-羧基-1，2，3，3-四甲基-3H-碘化吲哚盐和4-羟基苯甲醛混合溶于无水乙醇，超声至混合均匀，升温至80℃，回流4h；

II.待步骤I中反应液冷却后，抽滤，用冷冻的无水乙醇洗涤，真空干燥，得橙红色固体，即线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针。

3.如权利要求2所述的一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于，所述的步骤a中4-羧基苯肼盐酸盐和氢氧化钠的摩尔比为1∶4。

4.如权利要求2所述的一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于，所述的步骤c中4-羧基苯肼盐酸盐和3-甲基-2-丁酮的摩尔比为：1∶1。

5.如权利要求2所述的一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于，所述的步骤①中2，3，3-三甲基-3H-吲哚-5-羧酸与碘甲烷的摩尔比为：1∶4。

6.如权利要求2所述的一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于，所述的步骤b中醋酸钠与4-羧基苯肼盐酸盐的摩尔比为4∶1。

7.如权利要求2所述的一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于，所述的步骤I中5-羧基-1，2，3，3-四甲基-3H-碘化吲哚盐和4-羟基苯甲醛的摩尔比为：1∶1。

8.如权利要求1所述的一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针的应用，其特征在于，所述的比率型荧光分子探针在细胞的线粒体内靶向的pH敏感的比率荧光成像的应用。

9.如权利要求8所述的一种线粒体靶向的pH敏感的比率型荧光探针的应用，其特征在于，所述的细胞为HeLa细胞。