[发明专利]一种多重PCR检测六类大肠杆菌的试剂盒及其制备方法在审
| 申请号： | 201610222017.0 | 申请日： | 2016-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN105779605A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 胡彬;熊衍文;毕振旺;房明;刘宗东 | 申请（专利权）人： | 山东省疾病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250014 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 多重 pcr 检测 大肠杆菌 试剂盒 及其 制备 方法 | ||
1.一种多重PCR检测六类大肠杆菌的引物组，其特征在于，包括10对检测引物，分别为： Rrs基因检测引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；ipaH基因检测引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，下游引物核苷 酸序列如SEQIDNO.4所示；stx1基因检测引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.5所示， 下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；stx2基因检测引物，上游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；eae基因检测引物，上游引物核苷 酸序列如SEQIDNO.9所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；aggR基因检测引 物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.12所示； elt基因检测引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.14所示；estIa基因检测引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.15所示，下游引物 核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；estIb基因检测引物，上游引物核苷酸序列如SEQID NO.17所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.18所示；afaD基因检测引物，上游引物核苷 酸序列如SEQIDNO.19所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.20所示。
2.一种多重PCR检测六类大肠杆菌的试剂盒，其特征在于，包括：
权利要求1所述多重PCR检测六类大肠杆菌的引物组；
TaqDNA聚合酶；
dNTP溶液；
反应缓冲液；
ddH2O。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述多重PCR检测六类大肠杆菌的引物组 中，Rrs基因检测引物：ipaH基因检测引物：elt基因检测引物：aggR基因检测引物：eae基因 检测引物：stx1基因检测引物：stx2基因检测引物：estIa基因检测引物：estIb基因检测引 物：afaD基因检测引物的摩尔比为0.4：0.4：2：0.5：0.4：0.5：0.5：2：2：1，每50μlPCR反应总 体系中加入多重PCR检测六类大肠杆菌的引物组19.4μl。
4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述TaqDNA聚合酶浓度为5U/μl，每50μ lPCR反应总体系中加入0.8μlTaqDNA聚合酶。
5.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述dNTP溶液每50μlPCR反应总体系中加 入8μl。
6.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液为10×PCRbuffer，每50μ lPCR反应总体系中加入10μl。
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