[发明专利]一种转基因玉米种子中羊凝乳酶的表达方法在审
| 申请号： | 201610223297.7 | 申请日： | 2016-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN105647895A | 公开（公告）日： | 2016-06-08 |
| 发明（设计）人： | 刘文国;王云鹏;路明;张志军;王敏;吕庆雪;赵万庆;岳尧海;刘宏伟;张建新;马英杰;周旭东;孟令聪;李岩 | 申请（专利权）人： | 吉林省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;C12N15/82;A01H5/10 |
| 代理公司： | 北京国智京通知识产权代理有限公司 11501 | 代理人： | 孙文彬 |
| 地址： | 130033 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转基因 玉米种子 凝乳 表达 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种转基因玉米种子中羊凝乳酶的表达方法，其特征在于：包括以下步骤：通过PCR 法克隆玉米globulin-1基因的启动子Glzm1，在启动子上下游分别添加HindIII和NcoI酶切 位点，亚克隆到植物表达载体pCAMBIA3301上，替换GUS基因前面的35S启动子；
在羊凝乳酶基因编码氨基酸的N端添加6个组氨酸，根据玉米密码子偏好性对进行密码 子优化，并在基因上下游分别添加NcoI和BstEII酶切位点，序列设计好后进行合成；合成后 的序列替换植物表达载体上的GUS基因，最终成功构建玉米籽粒特异性表达载体pC330- Gprochymosin。
2.根据权利要求1所述的转基因玉米种子中羊凝乳酶的表达方法，其特征在于：冻融法 将构建好的玉米籽粒特异性表达载体pC330-Gprochymosin导入农杆菌EHA101中，以玉米品 种幼胚作为受体材料进行农杆菌介导的遗传转化，并用3mg/L的双丙氨膦进行筛选，在启动 子Glzm1上设计引物Glzm1F，在目的基因prochymosin上设计引物chyR，对所获得的抗性植 株进行PCR检测，所获得的阳性植株在温室中继续培养，自花授粉，收取种子。
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