[发明专利]穿梭质粒pMY03在干扰鸭疫里默氏杆菌目的基因表达中的方法及应用有效
| 申请号： | 201610225412.4 | 申请日： | 2016-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN105755032B | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 刘马峰;王梦怡;岳慧贤;程安春;汪铭书;贾仁勇;朱德康;陈舜;杨乔;吴英;孙昆峰 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74 |
| 代理公司： | 11275 北京同恒源知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王贵君 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 穿梭 质粒 pmy03 干扰 鸭疫里默氏 杆菌 目的 基因 表达 中的 方法 应用 | ||
1.穿梭质粒pMY03在干扰鸭疫里默氏杆菌目的基因表达中的应用，所述穿梭质粒pMY03由SEQ ID NO.1连入pPM5载体的Hind Ⅲ和Pst I酶切位点处而得。
2.利用穿梭质粒pMY03干扰鸭疫里默氏杆菌目的基因表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：克隆干扰目的基因编码区或截短片段，然后反向连入穿梭质粒pMY03的启动子与终止子之间获得干扰表达载体，然后将干扰表达载体转入鸭疫里默氏杆菌中即可；
所述穿梭质粒pMY03由SEQ ID NO.1连入pPM5载体的Hind Ⅲ和Pst I酶切位点处而得。
3.根据权利要求2所述利用穿梭质粒pMY03干扰鸭疫里默氏杆菌目的基因表达的方法，其特征在于：克隆鸭疫里默氏杆菌tonB1基因，然后反向连入穿梭质粒pMY03的启动子与终止子之间获得干扰表达载体pMY03::tonB1 antisense，然后将干扰表达载体pMY03::tonB1antisense转入鸭疫里默氏杆菌中即可。
4.根据权利要求3所述利用穿梭质粒pMY03干扰鸭疫里默氏杆菌目的基因表达的方法，其特征在于：克隆鸭疫里默氏杆菌tonB1基因是以鸭疫里默氏杆菌基因组为模板，SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3所示序列为引物进行PCR扩增而得。
5.根据权利要求4所述利用穿梭质粒pMY03干扰鸭疫里默氏杆菌目的基因表达的方法，其特征在于：所述PCR扩增的条件如下：98℃预变性30s；98℃变性10s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循环30次；72℃后延伸7min；最后22℃保存。
6.根据权利要求3～5任一项所述利用穿梭质粒pMY03干扰鸭疫里默氏杆菌目的基因表达的方法，其特征在于：所述将干扰表达载体pMY03::tonB1 antisense转入鸭疫里默氏杆菌的方法是先将干扰表达载体pMY03::tonB1 antisense转化供体菌S17.1，转化成功后通过接合转移的方法将干扰表达载体pMY03::tonB1 antisense转移至鸭疫里默氏杆菌。
7.根据权利要求6所述利用穿梭质粒pMY03干扰鸭疫里默氏杆菌目的基因表达的方法，其特征在于：所述鸭疫里默氏杆菌为RA ATCC11845。
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