[发明专利]一种红铃虫抗性基因AQ65检测引物组、试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种红铃虫抗性基因AQ65检测引物组，其特征在于包括下述引物：

上游引物AQ65F：TGGCTTCGGTAAAGACGCTAT，

下游引物AQ65R：TGGGATTACGGGCGTGAGT；

和

上游引物AQ65F2：5'CAATGGAAAGCACTGAAGGC 3'，

下游引物AQ65R2：5'GCTGGAGAAGAAATGGCAAGA 3'。

2.一种红铃虫抗性基因AQ65检测试剂盒，其特征在于包括：DNA提取液，PCR反应液，标准阳性模板，阴性质控标准品，权利要求1所述引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述PCR反应液包括LATaq酶、10×LATaq缓冲液-Mg²⁺Plus、dNTPs和无菌双蒸水。

4.权利要求2所述检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括下述步骤：

1)基因组DNA样品制备；

2)PCR检测；

其中所述试剂盒包括DNA提取液，标准阳性模板，阴性质控标准品，PCR反应液，权利要求1所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于包括下述步骤：

1)基因组DNA样品制备

样品来源：田间采集到的红铃虫个体，采用单头提取的方法，即单头红铃虫提取的基因组DNA为一个检测样本，红铃虫基因组DNA的提取使用天根公司Tiangen Biotech Co.,Ltd生产的血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒-离心柱型，实验操作具体步骤按照试剂盒说明书进行；

2)PCR检测

以提取的基因组DNA为模板，用设计的引物进行PCR扩增，其扩增的参数如下：94℃预变性2min；然后为35个循环，循环条件为：94℃变性30s，接着55℃退火30s，再72℃延伸1min；最后72℃保温10min，PCR反应体系为25μL，如下所示：

取出PCR反应所需试剂及保存的DNA样品于冰上解冻，Taq酶应现用现取，且用完后需马上放回-20℃保存，从而延缓酶活性的损失，反应液中各组分的比例如下：

PCR反应结束后，PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳后，于凝胶成像仪拍摄电泳图，根据特异引物扩增的目标条带判断是否含有AQ65品系的抗性等位基因。