[发明专利]一种水蛭素的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水蛭素的提取方法，属于水蛭素提取技术领域。

背景技术

水蛭素是水蛭及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65~66个氨基酸组成的小分子蛋白质(单链多肽)。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂，对人类心脑血管疾病尤其是脑血栓等血栓性疾病有较高的疗效，其防治效果是任何物质（包括目前临床上常规使用的阿司匹林和肝素）所难以比拟的，这是因为：一方面，天然水蛭素的抗栓功能不需要其它因子的参与，加上其分子量远比肝素要小，渗透性强，容易到达血栓内部，并将其溶解；另一方面，天然水蛭素不会像肝素等抗凝剂那样易引起出血等难以克服的副作用，从而使天然水蛭素成为世界公认的防治心脑血管疾病最好的天然药物。现有水蛭素的提取分为水蛭活体提取和干水蛭粉碎提取，水蛭素分布在水蛭的口部和分泌的唾液中，干水蛭粉碎提取的提取量低且提取工艺成本较高。现有技术中虽然存在活体提取水蛭素的设计，但其提取方法存在较多缺陷。

申请人发现现有的活体提取水蛭素的方法存在以下缺陷：首先，现有的活体提取方法对水蛭素的提取量低。水蛭的耐饥饿能力较强，一次吸饱血后能够多天甚至数月不进食，水蛭只有在进食的过程会分泌大量分泌液，分泌液中含有高含量的水蛭素，而现有的活体提取技术水蛭分泌的分泌液量较少。其次，现有的提取方法对水蛭活体造成伤害，无法高效的反复提取。现有的活体提取方法多采用对喂食后的水蛭进行电机刺激促使水蛭分泌唾液，或者水蛭吸饱血液后刺激水蛭反刍。现有的电刺激法活体水蛭提取中，当多条水蛭提取时电刺激法的电量不易控制，并且多次电刺激后水蛭的活力降低，水蛭素的提取量减少。现有的反刍法提取水蛭素时，需要先让水蛭吸饱血，再通过添加刺激剂促使水蛭反刍，其所得反刍液中水蛭素含量低，血液消耗量大，且操作过程中水蛭易死亡。现有技术中水蛭一次饱食提取后需将水蛭饥饿40~60天，才能进行下一次提取。再次，现有的提取方法所得粉末状水蛭素中细菌含量高，过高的细菌含量导致其只能用作口服制剂。最后，现有的提取方法所得粉末状水蛭素为黑色、深褐色或红棕色，颜色较重，杂质多且活性成分含量较低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种水蛭素的提取方法，该水蛭素的提取方法对水蛭素的提取量大，且能够反复提取，最终所得粉末状水蛭素色泽浅、活性成分含量高。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：该水蛭素的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）饥饿处理：将活的水蛭进行饥饿处理；

2）刺激分泌：保持环境温度23~40℃，在波长200nm～275nm紫外线照射下，向水蛭的体表喷洒诱导剂，紫外线照射时间为30~180秒，关闭紫外线，采用暖白光明灭闪烁的方式照射水蛭3~15分钟，或者采用暖白光和绿光交替明灭闪烁的方式照射水蛭3~15分钟，以刺激水蛭分泌分泌液；暖白光色温为2000~4500K，绿光波长500nm~560nm，暖白光闪烁频率和绿光的闪烁频率均为0.2~8Hz；

3）灭菌：收集分泌液，采用波长200nm～275nm紫外线照射分泌液进行杀菌；

4）浓缩：将分泌液采用25~40℃风干，或者采用冷冻干燥，获得固态粉末，即得。

所述的水蛭为日本医蛭、茶色蛭或菲牛蛭的活体。

步骤2）所述的诱导剂为血液和水按体积比1：1~10稀释后获得，诱导剂的体积与水蛭的质量按比值1~5ml：1000g使用。

所述的血液为鸡血、牛血、猪血、羊血中的至少一种。

步骤1）饥饿处理的具体操作为：保持环境温度23~40℃，将水蛭放入维C水溶液中静置2~12小时，维C水溶液由维生素C和水按质量比3~5：1000混合而成。

步骤2）的具体操作为：保持环境温度25~28℃，在波长250nm～270nm紫外线照射下，向水蛭的体表喷洒诱导剂，紫外线照射时间为60~120秒，关闭紫外线，采用暖白光明灭闪烁的方式照射水蛭5~10分钟，或者采用暖白光和绿光交替明灭闪烁的方式照射水蛭5~10分钟，以刺激水蛭分泌分泌液。

步骤2）所述的暖白光色温为2700~3200K，绿光波长520nm~540nm，暖白光闪烁频率和绿光的闪烁频率均为1~3Hz。

所述的步骤2）和步骤3）之间或者步骤3）和步骤4）之间还设有过滤步骤，过滤步骤的具体操作为：将分泌液通过滤膜过滤器过滤，过滤孔径为0.4~4微米。