[发明专利]用传代细胞系制备羊口疮病毒的方法

说明书

本发明公开了一种用传代细胞系制备羊口疮病毒的方法及其应用。使用传代细胞系接种羊口疮病毒，接种24h后细胞形态发生变化，48h后细胞开始肿胀、膨大，72‑96h细胞出现羊口疮典型病变，细胞病变(CPE)可达85％以上。本发明用传代细胞系制备羊口疮病毒的方法可以保证病毒的均一、稳定，同时可以防止因多次利用原代细胞而使所分离的病毒带有其它病原的风险；此外，利用传代细胞系制备羊口疮疫苗简化了疫苗的生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本、劳动强度，同时还能保证制备得到的羊口疮疫苗质量稳定，因此，对羊口疮疫苗的规模化生产具有重要意义。

技术领域

本发明属于病毒的制备方法及其应用，特别是涉及用传代细胞系制备羊口疮病毒强毒株的方法。

背景技术

羊口疮，又称为羊传染性脓疱病，是由副痘病毒成员羊传染性脓疱病毒引起的羊的一种局部性传染性疾病，以唇、鼻等部位皮肤的增生性病变为主，在进行剪毛、交易、潮湿的环境及屠杀等情况下容易发生。羊口疮主要感染羔羊和新生羊，其病变多集中于口部和鼻部周围，其临床症状会经历一个从红斑到囊泡和脓疱的过程，之后形成痂皮，病毒会随着痂皮的脱落进入周围环境。患羊口疮的成年羊因采食困难导致摄入营养不足，严重影响各项生产指标。新生羔羊患羊口疮则难以充分摄入母乳，严重影响羔羊生长发育，甚至饥饿死亡。除山羊和绵羊外，羊驼、驯鹿、海豹、麝牛、松鼠、羚牛、骆驼等一些野生动物也可感染羊口疮。用病毒灭活疫苗进行免疫是防治羊口疮症的一种有效措施。

羊口疮病毒制备方面，1957年，羊口疮病毒在羊胚胎原代细胞上成功复制此病毒，但病变并不是十分明显(Plowright W,Whitcomb M A,Ferris R D.1959.Studies with astrain of contagious pustular dermatitis virus in tissue culture.Arch GesVirusforsch,9:214-231.)。此后，用犊牛睾丸原代细胞、羔羊睾丸原代细胞成功增殖了羊口疮病毒，并观察到了典型的细胞病变反应(Sands J J,Scott A C,Harkness JW.1984.Isolation in cell culture of a poxvirus from red squirrel.Vet Rec,114(5):117-118.Pye D.1990.

Vaccination of sheep with cell culture grown orf virus.Aust vet J,67(5):182-186.Robinson A J,Balassu T T.1981.Contagious pustular dermatitis(Orf).J Vet Bull,51:771-781.)。一些外国学者利用羔羊肾细胞系、鸡胚成纤维细胞成功增殖了羊口疮病毒(Maria T,Mercante,Rosslla,Lelli,Gaetano,Federico,Ronchi.2008.Production and efficacy of an attenuated l ive vaccine againstcontagious ovine ecthyma.J Veterinaria Italiana,44(3):543-547.)。

然而，用原代羊睾丸细胞培养羊口疮病毒的过程中常受到羔羊日龄选择、采集羊睾丸时间、制备羊睾丸原代细胞过程繁琐、原代细胞不宜连续传代、原代细胞可能会带有其他病原体等问题的制约。

发明内容

为了解决现有技术中使用原代细胞存在的问题，本发明目的在于提供一种用传代细胞系制备羊口疮病毒的方法。

本发明所提供的用传代细胞系(Macr-145、MDBK细胞等)制备羊口疮病毒的方法，是将羊口疮病毒接种至传代细胞系上，产生羊口疮典型病变增殖羊口疮病毒。所述传代细胞系为Marc-145细胞或MDBK细胞(牛肾细胞)。