[发明专利]一种促进哈茨木霉根表定殖的蛋白及其应用

权利要求书

1.一种HFB蛋白，其特征在于该HFB蛋白包括HFB4蛋白和HFB8蛋白中的至少一种，所述的HFB4蛋白为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述的HFB8蛋白为如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

2.权利要求1所述HFB蛋白的编码基因，其特征在于所述HFB4蛋白的编码基因为如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；所述HFB8蛋白的编码基因为如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

3.含有权利要求2所述HFB蛋白编码基因的重组表达质粒。

4.含有权利要求2所述HFB蛋白编码基因的转基因细胞系。

5.含有权利要求2所述HFB蛋白编码基因的转基因工程菌。

6.根据权利要求3所述的重组表达质粒，其特征在于该重组表达质粒是将如SEQ ID NO.2所示的HFB4蛋白编码基因hfb4或如SEQ ID NO.4所示的HFB8蛋白编码基因hfb8插入到酵母表达质粒pPICZαA的EcoR I和Xba I酶切位点之间得到的。

7.根据权利要求6所述的重组表达质粒，其特征在于采用以下步骤制备：以哈茨木霉菌株SQR-T037的cDNA为模板分别设计引物进行PCR扩增，将得到的PCR扩增产物和酵母表达质粒pPICZαA分别用EcoR I和Xba I酶切连接后分别得到表达HFB4蛋白和HFB8蛋白的酵母表达质粒pPICZαA::HFB4和pPICZαA::HFB8；

克隆hfb4基因的引物如下：

上游引物hfb4-F: GGCTGAAGCTGAATTCACTCAGGAGCACCAGTTCGA（SEQ ID NO.5）

下游引物hfb4-R: GAGTTTTTGTTCTAGAATCTGGGGAAGGGCATCCTG（SEQ ID NO.6）

克隆hfb8基因的引物如下：

上游引物hfb8-F: GGCTGAAGCTGAATTCGCTGTCTGCCCTGATGGTG（SEQ ID NO.7）

下游引物hfb8-R: GAGTTTTTGTTCTAGAATGTGGGTTCCAGCGGGGTT（SEQ ID NO.8）。

8.根据权利要求5所述的转基因工程菌，其特征在于该转基因工程菌为将权利要求6或7所述的重组表达质粒用Sac I单酶切线性化后转化入感受态毕赤酵母KM71H细胞中得到的可分别表达HFB4蛋白和HFB8蛋白的酵母工程菌。

9.权利要求1所述的HFB蛋白在促进哈茨木霉根表定殖中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于为将HFB蛋白在酵母中表达后外源添加入作物种植体系中，快速增加哈茨木霉菌的定殖量。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于所述的作物是番茄或黄瓜。

12.权利要求1所述的HFB蛋白在制备以哈茨木霉为主的微生物菌肥中的应用。