[发明专利]一种利用黄绿木霉发酵制备烟用滇橄榄香料的方法有效
| 申请号： | 201610239878.X | 申请日： | 2016-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN105713845B | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 陈兴;张翼鹏;刘秀明;段焰青;李源栋;党立志;李海涛 | 申请（专利权）人： | 云南中烟工业有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C11B9/00;C12R1/885 |
| 代理公司： | 昆明协立知识产权代理事务所(普通合伙) 53108 | 代理人： | 谢嘉 |
| 地址： | 650231 云南省昆明*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 黄绿 发酵 制备 烟用滇 橄榄 香料 方法 | ||
1.一种制备滇橄榄烟用香料的方法，包括以下步骤：
（1）将保藏编号为CGMCC No. 10839的黄绿木霉（Trichoderma aureoviride）HLMM-04菌株活化两次后，接种于装有200 mL PDA液体培养基的三角瓶中，在初始pH 6.5，培养温度28℃，180 rpm下发酵培养5d；所述的PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1L，pH5.5～8.5，115℃高压灭菌15 min；所述的保藏编号为CGMCC No. 10839的黄绿木霉（Trichoderma aureoviride）HLMM-04菌株，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力；
（2）发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸铵 至80%饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2 mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液；所述的缓冲液为：0.02 mol/L Na2HPO4-NaH2PO4 ，pH 7.3；
（3）将滇橄榄破碎后加入两倍重量的水，混合均匀，调pH至6.0；加入黄绿木霉HLMM-04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为滇橄榄质量的5%～20%，发酵温度30℃，发酵时间2～5h；回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需烟用香料。
2.根据权利要求1所述的制备滇橄榄烟用香料的方法，其特征在于：按烟用香料重量的5%添加丙二醇。
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