[发明专利]多西环素一水物的有关物质及其分析检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种多西环素一水物光降解产物，以及该光降解产物的制备方法和分析检测方法。

背景技术

多西环素一水物又称强力霉素一水物，是一种抗感染药物，其抗菌谱和四环素、土霉素基本相同，但抗菌作用比四环素、土霉素强5～10倍，特别对四环素耐药的金黄色葡萄球菌有效。盐酸强力霉素口服吸收良好，排泄缓慢，血药浓度维持有效水平较四环素、土霉素久(半衰期15-20h)，每日口服一次即可，用于上呼吸道感染、渗出性及急性扁桃体炎、老年慢性支气管炎、肺部感染及尿路感染、菌痢、急性淋巴结炎等。

目前，对多西环素一水物的有关物质研究还不够，有待进一步研究。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种多西环素一水物的光降解产物，该光降解产物首次报道；

本发明的第二目的在于提供所述光降解产物的制备方法；

本发明的第三目的在于提供所述光降解产物的分析检测方法；

本发明的第四目的在于提供所述光降解产物在多西环素一水物及其制剂的有关物质检查项中作为杂质对照品的用途。

上述目的是通过如下技术方案实现的：

一种多西环素一水物光降解产物，化学结构式如下：

一种所述光降解产物的制备方法，包括如下步骤：

(1)光照破坏样品制备：将多西环素一水物光照破坏，先经冷白荧光灯照射，再经紫外荧光灯照射；

(2)降解产物富集：将上述光照破坏样品溶于甲醇体积百分浓度为80％的甲醇水溶液中，搅拌，抽滤，收集滤液，减压浓缩得浓缩物；

(3)降解产物粗品：将上述浓缩物用正相硅胶柱色谱分离，用体积比为6:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集8～10个柱体积洗脱液，浓缩得降解产物粗品；

(4)反相硅胶柱制备：将上述降解产物粗品用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为85％的甲醇水，等度洗脱，收集9～11个柱体积洗脱液，浓缩，冷冻干燥即得所述光降解产物。

进一步地，步骤(1)所述光照破坏方法为：先经一百二十万勒克斯冷白荧光灯照射15～25小时，再经200瓦小时/平方米的紫外荧光灯照射10～20小时。先经冷白荧光照射，再经紫外荧光照射，能显著提高所述光降解产物的得率，光照时间过长不但不能继续提高得率，反而会有降低趋势，可能是因为会进一步转化成其他化学物质。

进一步地，步骤(3)所述正相硅胶粒径大小为200～300目。分离硅胶粒径大小决定了硅胶表面积，粒径太大会导致所述光降解产物与极性相近的杂质难以分离开，粒径太小会显著增大柱内压力，洗脱速度过慢。同时，硅胶粒径还影响所需要的洗脱液体积。

一种所述光降解产物的液相分析检测方法，HPLC色谱条件包括：

色谱柱：Agilent Zorbax Extent-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：A为乙腈，B为0.5％磷酸溶液；

梯度洗脱程序：0.01～5min，A 10％→15％；5～10min，A 15％→48％；10～25min，A48％→78％；25～30min，A 78％→10％；

流动相流速：1.0mL·min^-1；

检测波长：284nm；

柱温：35℃；

进样量：10μL。

上述色谱条件下，所述光降解产物能与极性相近的化合物完全分离开，分离度大于1.5。流动相在284nm检测波长下紫外本底吸收低，且284nm为所述光降解产物的最大吸收波长，保证了所述光降解产物的响应灵敏度，提高检出量。

所述的多西环素一水物光降解产物在多西环素一水物及其制剂的有关物质检查项中作为杂质对照品的用途。该光降解产物容易获得，且纯度高(大于98％)，可以使用该化合物作为对照品利用外标法对其进行质量控制。

本发明的有益效果：

(1)本发明发现了一种多西环素一水物光降解产物，该降解产物结构首次报道；

(2)本发明提供的所述光降解产物的制备方法简单易行，可大量制备该降解产物；

(3)本发明提供的液相分析方法能快速检测出所述降解产物，选择该降解产物的最大吸收波长作为检测波长，提高了该降解产物的检出率，结果准确可靠；

(4)本发明提供的光降解产物可以用于多西环素一水物及其制剂的有关物质检查，进一步提高多西环素一水物及其制剂的质量标准，提高其安全性和可控性。