[发明专利]基于微卫星标记Thymall-01的新疆北极茴鱼检测引物和方法

权利要求书

1.一组利用微卫星标记Thymall-01对新疆北极茴鱼基因型进行检测的引物，其特征在于，

其中所述的引物为序列：

正链5’-TCTGGTCCTGGTGGAATTGT-3’，

负链5’-TGTAGTCATTCCTCCCCGTC-3’，使用该引物时的退火温度为58℃。

2.利用微卫星标记Thymall-01对新疆北极茴鱼基因型进行检测的方法，其特征在于，首先提取新疆北极茴鱼肌肉中的基因组DNA并稀释备用；再利用新疆北极茴鱼DNA序列中含有的微卫星核心序列，使用特异性引物对新疆北极茴鱼不同个体的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，从而确定新疆北极茴鱼不同个体在Thymall-01核心序列区的基因型，其中所述的新疆北极茴鱼微卫星标记Thymall-01的特异性引物为：

正链5’-TCTGGTCCTGGTGGAATTGT-3’，

负链5’-TGTAGTCATTCCTCCCCGTC-3’，使用该引物时的退火温度为58℃。

3.如权利要求2所述的利用微卫星标记Thymall-01对新疆北极茴鱼基因型进行检测的方法，其特征在于，对不同新疆北极茴鱼个体的基因组DNA进行的PCR扩增，其加样参数为：每个PCR反应总体积为25μL，包括100ng新疆北极茴鱼基因组DNA；10×PCR Buffer，2.5μL；Mg²⁺ 1.5 mmol/L；Taq酶1u；dNTP 0.1mmol/L；权利要求2中的特异性引物各10 pmol；最后加ddH₂O至25μL；设置PCR仪的程序参数为：94℃变性5min；94℃ 45sec，58℃ 1min，72℃40sec，该反应进行35个循环；72℃延伸5 min，4℃保存。

4.如权利要求2所述的利用微卫星标记Thymall-01对新疆北极茴鱼基因型进行检测的方法，其特征在于，对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的步骤：将PCR产物在8％的变性聚丙烯酰胺凝胶中以15W恒功率电泳1.5小时进行分离, 以10％的冰醋酸溶液浸泡30min，然后蒸馏水冲洗5min，再以0.1％的硝酸银溶液浸泡30min，用3％的碳酸钠溶液显色5min，最后用10％的冰醋酸溶液浸泡5min。

5.权利要求2-4中任意一项所述的方法在新疆北极茴鱼群体间遗传多态性图谱构建上的应用。