[发明专利]具有昆虫拒食活性和生长抑制活性的化合物及其制备方法

说明书

本申请是2014103695394号专利申请的分案申请。

原申请的申请日是：2014年7月30日。

原申请的申请号是：201410369539.4。

原申请的发明创造名称是：具有昆虫拒食活性和生长抑制活性的化合物及其制备方法。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及瑞诺烷二萜化合物1-11的分离制备方法及用途。具体涉及分离纯化过程，结构确证，免疫抑制、昆虫拒食和生长抑制作用等。

背景技术

自身免疫性疾病是仅次于心血管疾病和癌症的第三大疾病，目前已开发了大量的免疫抑制药物，主要用于防止器官移植中的排斥反应和抑制某些自身免疫性疾病的进展等。其中不少药物虽具有免疫抑制作用，但毒副作用强，容易造成全身性免疫抑制。寻找并开发出高效低毒的免疫抑制先导化合物是世界医药学界的一项重大课题。最新的研究发现，自身免疫性疾病和T细胞关系尤其密切。ConA能在体外刺激T细胞表面的受体，选择性激活T细胞过度增殖，因此，利用ConA建立的脾T细胞的增殖模型可快速、高效的筛选免疫抑制的化合物。

甜菜夜蛾和棉铃虫都是世界范围内广泛分布的杂食性农业害虫，主要危害棉花、玉米、大豆和蔬菜等作物。目前防治甜菜夜蛾和棉铃虫仍然主要依赖于化学农药，但大量不合理地使用化学农药造成了土地、水、空气的污染，植物抗药性产生以及危害人体牲畜健康等灾害性弊端。因而植物性农药的开发成为近年来的研究热点，植物中的杀虫物质主要是次生代谢物质，不会污染环境，对农作物和生态环境相对安全，且昆虫也不易产生抗药性，因此植物性农药的开发应用在当前“绿色食品”生产中发挥着越来越重要的作用。

肉桂皮是樟科植物肉桂树(Cinnamomum cassia Presl(Lauraceae))的干燥树皮，肉桂叶即为肉桂的干燥树叶。肉桂能调节人体免疫力，肉桂及其异瑞诺烷二萜具有抗补体的活性，肉桂具能驱虫、净化空气，肉桂中有能使昆虫拒食的活性成分。

发明内容：

本发明的任务是提供肉桂中具有生物活性的化合物及其分离制备方法和应用。

实现本发明的技术方案是：

从肉桂中分离得到瑞诺烷二萜类化合物的方法包括以下步骤：

将干燥肉桂皮粉碎，用乙醇室温提取，合并乙醇提取液并减压回收浓缩成浸膏，得到总膏，热水将总膏分散至混悬状，依次用极性递增的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收萃取液减压浓缩得乙酸乙酯部位，正丁醇部位，石油醚及氯仿部位去除。

将乙酸乙酯部位进行硅胶柱层析，氯仿至甲醇梯度洗脱(氯仿/甲醇10:1-3:1)，氯仿/甲醇6:1时得一段Fr.1，Fr.1经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1)得一部位，此部位再经凝胶、制备液相纯化得到化合物1；

将正丁醇部位进行硅胶柱层析，氯仿至甲醇梯度洗脱(氯仿/甲醇10:1-3:1)，氯仿/甲醇8:1时得Fr.2，氯仿/甲醇6:1时得Fr.3，氯仿/甲醇5:1时得Fr.4，氯仿/甲醇4:1时得Fr.5；Fr.2经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1)得一部位，此部位再经凝胶、制备液相纯化得到化合物4、5；Fr.3经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1-7:3)得二部位分别为Fr.3.1、Fr.3.2。Fr.3.1经硅胶、凝胶、制备液相纯化得到化合物2、6、7；Fr.3.2经凝胶、制备液相纯化得到化合物8、9；Fr.4经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1)，再经硅胶、凝胶、制备液相纯化得到化合物3、11；Fr.5经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇8:2)得一部位，此部位再经硅胶、凝胶、制备液相纯化得到化合物10。本发明分离得到的瑞诺烷二萜类化合物1-11的结构式及名称见表1，分离流程见附图1。

表1.本发明从肉桂中分离得到的瑞诺烷二萜类化合物1-11结构式

其中化合物肉桂萜F、肉桂萜G为新骨架化合物，19-脱氧肉桂萜G 16-葡萄糖苷和18-hydroxyperseanol为新化合物。化合物1的单晶衍射结构图见附图2，化合物2的单晶衍射结构图见附图3。