[发明专利]一种水貂绿脓杆菌二价灭活疫苗

说明书

技术领域

本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种水貂绿脓杆菌二价灭活疫苗。

背景技术

水貂出血性肺炎又称水貂假单胞菌性肺炎，是主要发生在每年8-11月份水 貂换毛季节的一种急性传染病，以出血性肺炎、急性死亡为特征，死前出现呼 吸困难、鼻孔流出红色带泡沫液体等症状，死后剖检可见整个肺叶肿大并有弥 漫性出血和败血症变化。本病世界各地均有发生，每年可造成养殖场20％-40％ 的死亡率，是危害毛皮动物养殖业的重要细菌性传染病。

该病病原为假单胞菌科(Pseudomonadaceae)假单胞菌属(Pseudomonas) 中的铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginolsa)，亦称为绿脓杆菌(Bacterium pyocyaneum)，为革兰氏阴性杆菌，两端钝圆，一端有一根鞭毛，能运动。不能 形成芽孢及荚膜。在普通琼脂培养基上生长良好，形成大小不一的菌落。多数 能产生色素，使菌落周围琼脂培养基着色。绿脓杆菌共有A、B、C、D、E、F、 G、H、I、G、K、L、M、N等14个血清型。我国各地水貂出血性肺炎的流行 血清型主要以G(6型)、B(2、5、16型)为主(括号内为对应的国际血清分 型系统IATS)。

水貂出血性肺炎发病急，死亡快，发病时往往来不及治疗，常用药物替米 考星、阿奇霉素、卡那霉素治疗效果不显著，而且抗生素的滥用导致绿脓杆菌 已产生耐药性，因此需要有效的疫苗来预防，国外有报道将细菌细胞壁提取物 (JAMESE.PENNINGTON，1979)加类毒素成分弹性蛋白酶制成免疫原，有一 定的免疫效果，但制备过程复杂，成本高，不适合大量生产使用，而且免疫次 数多，免疫期短，不适合临床应用，绿脓杆菌抗原型繁多，单一成分的细胞提 取物往往很难达到很好的保护效果。目前各国在水貂出血性肺炎的预防中多以 菌体灭活疫苗产品为主，将流行血清型的菌株灭活后制备成多价灭活疫苗，可 有效预防同类血清型菌株引起的该病。

发明内容

本发明的目的是提供一种水貂绿脓杆菌二价灭活疫苗，从而解决水貂绿脓 杆菌灭活疫苗研发中现有疫苗株免疫原性不强、各血清型之间免疫交叉保护力 低的问题。

本发明的一种二价水貂绿脓杆菌灭活疫苗，包括有抗原和疫苗佐剂，其中 使用的抗原为灭活的B型水貂绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginlsa)LN03株和灭 活的G型水貂绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginlsa)SD17株；

其中绿脓杆菌LN03株(PseudomonasaeruginlsaLN03)，该菌株于2016年 2月22日保藏在中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)， 保藏编号为CCTCCNO：M2016068。

绿脓杆菌SD17株(PseudomonasaeruginlsaSD17)，该菌株于2016年2月 22日保藏在中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏 编号为CCTCCNO：M2016069。

上述的水貂绿脓杆菌是用甲醛进行灭活的；

优选佐剂为蜂胶佐剂或水佐剂。

本发明制备的灭活疫苗安全可靠，能提供有效地同源攻毒保护，免疫后能 够产生较强免疫力，接种貂群的发病率和死亡率均明显减少，能够有效预防水 貂出血性肺炎的流行和传播，降低本病对毛皮动物养殖业造成的经济损失，有 着广阔的应用前景。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。

本发明具体实施例所使用的培养基如下：

生产用培养基：

十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基(NAC)配制：称取4gNAC粉末加入100 mL蒸馏水中，充分混匀后，121℃灭菌15min，冷却至50℃～60℃时，倾倒平 板备用。

改良营养普通肉汤培养基(NB)配制：称取5gNB粉末加入100mL蒸馏 水中，121℃灭菌15min。临用前加入终浓度2％胎牛血清的营养肉汤培养基， 混合均匀后配制而成。

发酵培养基配制：蛋白胨2％，牛肉膏0.6％，氯化钠0.5％，葡萄糖0.5％， 用去离子水配成，配完调pH值7.4～7.6，112℃30min，灭菌后按照培养基的 2％加入健康胎牛血清。

实施例1：

1.1绿脓杆菌菌株的分离纯化方法