[发明专利]一种用于免疫细胞悬浮培养的血清替代物

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于免疫细胞悬浮培养的血清替代物，属于细胞工程与生物医药技术领域。

背景技术

体细胞治疗是指应用人的自体、同种异体或异种(非人体)的体细胞，经体外操作后回输(或植入)人体的治疗方法。这种体外操作包括细胞在体外的传代、扩增、筛选以及药物或其他能改变细胞生物学行为的处理，经过体外操作后的体细胞可用于疾病的治疗，也可用于疾病的诊断和预防。体细胞治疗具有多种不同的类型，包括体内回输体外激活的单个核细胞如淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine Activated Killer Cells，LAK)、肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor Infiltrative Lymphocytes，TIL)、单核细胞、巨噬细胞或体外致敏的杀伤细胞(IVS)等。国内的免疫细胞治疗较多应用于治疗肿瘤及病毒性感染疾病如肝炎、艾滋病等。目前临床中应用较为成熟的自体免疫细胞治疗技术是肿瘤生物治疗的重要方法之一，是在多种免疫活性因子的作用下，有效活化和扩增从自体外周血中分离的免疫活性细胞(单个核细胞)，回输入患者体内，直接杀伤或诱导免疫效应细胞杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能。自体免疫细胞治疗技术包括细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine Induced Killer Cells，CIK)免疫治疗、树突状细胞(Dendritic Cells，DC)免疫治疗、DC-CIK细胞免疫治疗、自然杀伤细胞(Nature Killer，NK)免疫治疗等。

CIK细胞最早是1991年由美国斯坦福大学Schmidt Wolf等首次报道，他们发现在多种细胞因子如γ干扰素、CD3单抗、白介素-1和白介素-2等的共同作用下，外周血淋巴细胞可以被定向诱导并大量增殖成为肿瘤杀伤细胞。由于该种细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，因此具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非主要组织相容性复合体限制性杀瘤的优点。与其他免疫治疗细胞相比，CIK细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、副作用小、对正常骨髓造血影响轻微等优点，因此，应用CIK细胞进行自体免疫细胞治疗被认为是新一代肿瘤治疗的首选方案。

细胞培养基作为细胞培养中的主要载体，对免疫细胞在体外的活化和扩增效果以及肿瘤细胞杀伤效果都起到至关重要的作用，对自体免疫细胞治疗技术的推广应用有重大影响。现在常用于临床CIK细胞培养的完全培养基一般为含有10％AB型人血清的 RPMI1640培养基，因其含有人AB型血清，虽经HBV、HCV及HIV的检测，但仍有可能传播其他疾病，安全性低，并且还存在批间差异大、不宜质控、成分不明确、价格昂贵等问题。与传统的完全培养基相比，无血清培养基可达到生物洁净要求、成分明确、质量稳定，便于质控，客服了人AB型血清的缺点，能减少患者意外感染的机会，对于免疫治疗的推广应用有重要意义。多数研究表明，无血清培养基可代替含血清的完全培养基，二者所得培养物的数目和功能相当，蒋永新等人对无血清培养基与完全培养基体外诱导扩增CIK细胞的细胞功能进行了系统性的分析，通过对CIK细胞增殖能力、细胞表型分析以及杀瘤活性等方面的研究结果表明无血清培养基支持细胞增殖能力更为稳定可靠，使用无血清培养基培养所得细胞功能未收到损害。(蒋永新等，中华肿瘤防治杂志，2006，13[12]：900-903；蒋永新等，肿瘤防治研究，2006，33[11]：784-787)

无血清培养过程中添加血清替代成分的方式有两种，一种是在新研发的无血清培养基成分中已经包含了各种血清替代成分，可直接进行培养；另一种是单独提供血清替代物，在培养时代替血清添加进入培养体系中，还需另行添加部分血清替代成分如生长因子、激素等。目前市场上可商购获得的血清替代物大部分为进口产品，如Gibco公司的KnockOutTM SR和Amsbio公司的PuriQTM Serum Replacement均适用于胚胎干细胞的无血清培养，Sigma Aldrich公司提供的SERUM REPLACEMENT 3以及Biowest公司提供的FreeAdd则适用于常规细胞的无血清培养。