[发明专利]源自假单胞菌6-19的PHA合酶的突变体和使用该突变体制备乳酸酯均聚物或共聚物的方法

权利要求书

1.一种聚羟基链烷酸酯合酶突变体，该突变体使用乳酰辅酶A作为底物生产乳酸酯均聚物或者乳酸酯共聚物并且具有SEQ.IDNo:10的氨基酸序列，其中，所述氨基酸序列具有如下任何一种突变：

b)E130D和Q481K；

d)E130D和Q481M；

e)E130D和Q481R；

f)E130D、S325T和Q481M；

g)E130D、S325T和Q481K；

h)E130D、S477R和Q481K；

i)E130D、S477R和Q481M；

j)E130D、S477R和Q481R；

k)E130D、S477H和Q481K；

l)E130D、S477H和Q481M；

m)E130D、S477H和Q481R；

n)E130D、S477F和Q481K；

o)E130D、S477F和Q481M；

p)E130D、S477F和Q481R；

q)E130D、S477Y和Q481K；

r)E130D、S477Y和Q481M；

s)E130D、S477Y和Q481R；

t)E130D、S325T、S477R和Q481M；

u)E130D、S325T、S477R和Q481K；

v)E130D、S325T、S477F和Q481M；或

w)E130D、S325T、S477G和Q481M。

2.一种基因，其编码权利要求1所述的聚羟基链烷酸酯合酶突变体。

3.一种重组载体，其包含用于合成乳酸酯均聚物或共聚物的权利要求2所述的基因。

4.如权利要求3所述的重组载体，其进一步包含编码丙酰辅酶A转移酶(pct)的基因。

5.一种微生物，其是用权利要求3所述的重组载体转化的。

6.一种微生物，其是由用权利要求4所述的重组载体转化而获得的，其中，原始微生物没有编码丙酰辅酶A转移酶的基因。

7.一种制备乳酸酯均聚物或乳酸酯共聚物的方法，其中，所述方法包括培养包含编码丙酰辅酶A转移酶(pct)的基因和编码使用乳酰辅酶A作为底物的聚羟基链烷酸酯合酶突变体的基因的微生物，其中，所述聚羟基链烷酸酯合酶突变体具有SEQ.IDNo:10的氨基酸序列，其中，所述氨基酸序列具有如下任何一种突变：

b)E130D和Q481K；

d)E130D和Q481M；

e)E130D和Q481R；

f)E130D、S325T和Q481M；

g)E130D、S325T和Q481K；

h)E130D、S477R和Q481K；

i)E130D、S477R和Q481M；

j)E130D、S477R和Q481R；

k)E130D、S477H和Q481K；

l)E130D、S477H和Q481M；

m)E130D、S477H和Q481R；

n)E130D、S477F和Q481K；

o)E130D、S477F和Q481M；

p)E130D、S477F和Q481R；

q)E130D、S477Y和Q481K；

r)E130D、S477Y和Q481M；

s)E130D、S477Y和Q481R；

t)E130D、S325T、S477R和Q481M；

u)E130D、S325T、S477R和Q481K；

v)E130D、S325T、S477F和Q481M；或

w)E130D、S325T、S477G和Q481M。

8.如权利要求1所述的方法，其中，所述培养是在含有羟基链烷酸酯的培养基中进行的，并且所述共聚物为含有羟基链烷酸酯单体单元和乳酸酯单体单元的共聚物。