[发明专利]一种与水稻小种专化性抗稻瘟病基因紧密连锁的分子标记及其应用

权利要求书

1.一种用于检测与水稻小种专化性抗稻瘟病基因紧密连锁的分子标记的引物对或引物对组，其特征在于所述的引物对为引物对A或引物对B；所述的引物对组由引物对A和引物对B组成；所述引物对A为由如SEQ ID NO.1所示的核苷酸片段和如SEQ ID NO.2所示的核苷酸片段组成的引物对；所述引物对B为由如SEQ ID NO.3所示的核苷酸片段和如SEQ IDNO.4所示的核苷酸片段组成的引物对。

2.权利要求1所述的引物对或引物对组在制备用于检测或辅助检测水稻小种专化性抗稻瘟病基因的试剂盒中的应用。

3.一种用于检测或辅助检测水稻小种专化性抗稻瘟病基因的试剂盒，其特征在于该试剂盒包含有权利要求1所述的引物对或引物对组。

4.根据权利要求3所述的用于检测或辅助检测水稻小种专化性抗稻瘟病基因的试剂盒，其特征在于该试剂盒还包含有PCR技术常用的试剂。

5.权利要求1中所述的引物对或引物对组、权利要求3或4中所述的试剂盒在检测或辅助检测水稻小种专化性抗稻瘟病基因或选择水稻抗稻瘟病品种中的应用。

6.一种检测水稻小种专化性抗稻瘟病基因或选择水稻抗稻瘟病品种的分子标记方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取待测水稻样品基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述的引物对或引物对组进行PCR扩增，获得PCR产物；

(3)检测PCR产物如果扩增出大小为84bp或/和158bp的分子标记片段，标志水稻样品中小种专化性抗稻瘟病基因Pi-hk2存在，则待测的水稻样品为抗稻瘟病品种或候选的抗稻瘟病品种。

7.根据权利要求6所述的检测水稻小种专化性抗稻瘟病基因或选择水稻抗稻瘟病品种的分子标记方法，其特征在于所述PCR扩增的反应体系为：10×含Mg²⁺的缓冲液1.0μl，4pmol/μl的所述分子标记引物对1μl，2.5mM dNTPs 0.2μl，5U/μl的Taq酶0.1μl，10ng/μl的水稻样品基因组模板DNA 1μl，加水至10μl。

8.根据权利要求6所述的检测水稻小种专化性抗稻瘟病基因或选择水稻抗稻瘟病品种的分子标记方法，其特征在于所述PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5分钟后；95℃变性40秒，55℃退火40秒，72℃延伸40秒，循环33次；最后72℃延伸10分钟。

9.权利要求6所述的方法在提高水稻抗病品种育种进程中的应用。